【摘 要】
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目的:探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为microRNA(miRNA)结合蛋白的生物学特性.方法:Western印迹检测LPS激活的U937细胞中TNF-α蛋白表达水平,RT-PCR检测几种炎症相关的miRNA
【机 构】
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广西医科大学,军事医学科学院基础医学研究所
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目的:探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为microRNA(miRNA)结合蛋白的生物学特性.方法:Western印迹检测LPS激活的U937细胞中TNF-α蛋白表达水平,RT-PCR检测几种炎症相关的miRNA在激活前后表达水平的变化;用RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)技术钓取U937细胞中TNF-α结合的miRNA,RT-PCR检测RIP产物中上述几种miRNA的含量;用凝胶阻滞实验检测TNF-α与miRNA是否直接结合.结果:LPS激活的U937细胞中能检测到膜结合型和可溶性2种形式的TNF-α,细胞激活前后miR-16和miR-21的表达水平在检测的几种miRNA中最高,miR-146b和miR155次之;而RIP产物中miR-146b的水平在实验组和对照组中有显著差异,其他miRNA差异不明显;凝胶阻滞实验结果显示miR-146b能与人TNF-α直接结合.结论:首次证实人TNF-α能够直接特异地结合miR-146b,提示TNF-α可能作为miRNA结合蛋白发挥生物学功能.
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