【摘 要】
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纳米抗体（nanobody,Nb）作为目前已知的能与目标抗原结合的最小单位抗体，在生物医药、临床研究等方面具有良好的应用前景。根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2）中和性纳米抗体H11-D4基因，将其克隆到pET28a表达载体上后，转化至大肠杆菌感受态细胞R
【基金项目】
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宁夏回族自治区重点研发计划（2020BFG02017）； 国家自然科学基金项目（32002236;32072796）；
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纳米抗体（nanobody,Nb）作为目前已知的能与目标抗原结合的最小单位抗体，在生物医药、临床研究等方面具有良好的应用前景。根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2）中和性纳米抗体H11-D4基因，将其克隆到pET28a表达载体上后，转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta（DE3）进行诱导表达，通过镍柱纯化、质谱分析、Western Blot鉴定H11-D4的表达情况并使用中和试验验证其中和活性。研究结果显示，纳米抗体H11-D4可成功在大肠杆菌中表达，最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1,37℃诱导5 h。H11-D4抗体的分子量大小约为17.9 kD，与预测值相符。经镍柱纯化后，产量为25.16 mg·L-1。透析复性后利用TritonX-114快速有效地去除了内毒素，中和试验成功验证了H11-D4的中和活性（IC50）为171.1 nmol·L-1，研究结果可为纳米抗体的原核表达和新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019,COVID-19）的预防及治疗提供基础数据支撑。
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