【摘 要】
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目的:研究DNA损伤诱导凋亡抑制因子(DDIAS)在川崎病(KD)患儿血液中的表达及意义.方法:通过彩色多普勒超声心动图检查96例KD患儿的冠状动脉损伤(CAL)情况,根据CAL存在情况将患儿分为CAL组和非CAL组.选取我院同期体检的30例健康儿童作为对照组.通过ELISA试剂盒检测受试者外周血中DDIAS的水平.将靶向DDIAS的小干扰RNA(siRNA)(DDIAS-siRNA)和阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染到人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)中,并用10 ng/mL TNF-α处理细胞
【机 构】
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西安市儿童医院超声科 陕西西安710003;陕西省儿科疾病研究所 陕西西安710003;西安市儿童医院心血管内科 陕西西安710003;西安交通大学第二附属医院心内科 陕西西安710004
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目的:研究DNA损伤诱导凋亡抑制因子(DDIAS)在川崎病(KD)患儿血液中的表达及意义.方法:通过彩色多普勒超声心动图检查96例KD患儿的冠状动脉损伤(CAL)情况,根据CAL存在情况将患儿分为CAL组和非CAL组.选取我院同期体检的30例健康儿童作为对照组.通过ELISA试剂盒检测受试者外周血中DDIAS的水平.将靶向DDIAS的小干扰RNA(siRNA)(DDIAS-siRNA)和阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染到人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)中,并用10 ng/mL TNF-α处理细胞.通过RT-PCR分析细胞中的TNF-α、IL-6和HO-1 mRNA水平,通过Western blot分析DDIAS、NF-κB p65和I-κBα的蛋白水平.此外,评估了各组HCAEC细胞中的超氧化物和谷胱甘肽(GSH)含量及其与单核细胞的粘附.结果:与对照组比较,KD组的DDIAS水平显著升高(P＜0.001).与非CAL组比较,CAL组的DDIAS水平显著升高(P＜0.01).外周血DDIAS诊断KD的AUC、敏感性和特异性依次为0.747、65.62％和80.65％,外周血DDIAS诊断CAL的AUC、敏感性和特异性依次为0.733、63.83％和75.51％.与NC-siRNA+TNF-c组相比,DDIAS-siRNA+TNF-α组HCAEC细胞中的TNF-α mRNA表达水平降低了51.45％,IL-6 mRNA表达水平降低了59.46％,细胞核NF-κB p65的蛋白表达水平降低了26.40％,细胞质I-κBα的蛋白水平升高了91.30％(P＜0.05).与NC-siRNA+TNF-α组相比,DDIAS-siRNA+TNF-α组粘附实验的相对荧光强度降低了53.42％(P＜0.05).与NC-siRNA+TNF-α组相比,DDIAS-siRNA+TNF-α组HCAEC细胞中的超氧化物相对荧光强度降低了35.38％,HO-1 mRNA水平升高了1.35倍,GSH水平升高了94.59％(P＜0.05).结论:DDIAS对KD及CAL均有较高的诊断价值,下调DDIAS减轻TNF-α诱导的HCAEC细胞损伤.
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