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目的:克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达.方法:用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和κ链的基因,重组到Fab表达载体中,在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab;根据前导肽序列设计引物,通过PCR介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列;以NIH3T3/erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定.结果:以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到F