【摘 要】
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目的:建立测定人肝细胞L02内、外液中金丝桃苷(Hyp)含量的方法.方法:以80μg·mL-1的Hyp与L02共孵育0、3、6、12、24 h后,采用高效液相色谱(HPLC)法测定细胞内、外液中金丝桃
【机 构】
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第三军医大学第一附属医院国家药品研究临床药理基地,重庆市,400038
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目的:建立测定人肝细胞L02内、外液中金丝桃苷(Hyp)含量的方法.方法:以80μg·mL-1的Hyp与L02共孵育0、3、6、12、24 h后,采用高效液相色谱(HPLC)法测定细胞内、外液中金丝桃苷的含量.色谱柱为KROMASIL C18(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸(45:55),柱温为30℃,流速为1.0 mL·min-1,紫外检测波长为360 nm.结果:细胞外液中Hyp的标准曲线为y=35.412X-8.586(r=0.999 9),表明Hyp检测浓度在2～200μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;细胞内液中Hyp的标准曲线为y=35.759X一7.422(r=0.999 9),表明Hyp检测浓度在0.1～10μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系.细胞外、内液中Hyp的平均回收率分别为(96.00±2.43)%、(97.18±4.62)%,平均日内RSD分别为1.98%、4.36%,平均日间RSD分别为1.75%、2.86%.样品溶液处理后室温放置22h,未处理样品溶液于一20℃放置6 d,平均RSD均＜5%.结论:本方法简单、准确、线性范围宽、灵敏度高、精密度和回收率良好,可为进一步研究Hyp的抗氧化作用与机制奠定方法学基础.
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