【摘 要】
：
目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-
【机 构】
：
中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所核医学室,中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所
论文部分内容阅读
目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实。将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的蛋白经组氨酸镍螯和树脂亲和纯化。以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性。结果小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被G置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达。表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43000,Trx Mr为19000。在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖。结论小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同。成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性。
其他文献
我厂生产的东方红54型拖拉机汽缸体(铸件重274公斤,湿型浇注,大量生产)长期以来表面夹砂及粘砂缺陷十分严重,夹砂废品率最高时曾达到5．3%。在生产量小的手工造型工厂中,常用的
异位妊娠是妇产科常见的急腹症,近年来,异位妊娠的发生率呈上升的趋势。随着血清人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）测定敏感性的提高,阴道超声的广泛应用,早期异位妊娠的诊断更加准确
为了研究乙烯丙烯酸共聚物（EAA）涂层的防腐蚀性能，采用火焰喷涂技术制备了EAA涂层，利用傅里叶变换红外光谱（FTIR）研究了火焰喷涂对EAA涂层结构的影响；用扫描电镜（SEM）和拉伸强度试验研
目的了解灵宝市各级医疗单位消毒灭菌质量，进一步落实医院消毒管理措施。方法用现场抽检方法进行采样和检测。结果各项指标监测合格率：室内空气为55．12％，物体表面为76．57％，医护人员手
海洋中的生物为了适应海洋的独特环境，在漫长的进化中形成了许多特殊的结构，可为人类提供众多功能独特的活性物质，如萜类、甾醇类、生物碱、甙类、多糖、肽类、核酸、蛋白质、酶
目的对比研究过敏性紫癜性肾炎（HSPN）和IgA肾病在临床及肾脏病理改变上的异同，探讨两者的关系。方法对经肾活检证实的40例过敏性紫癜性肾炎患者及38例IgA肾病患者进行详细的临床
随着改炉节焦工作的开展,各地先后出现了不少新的炉型。本文主要介绍三节卡腰化铁炉的结构、特征、性能参数及工艺操作情况,供参考。
利用电弧熔炼和热处理的方法获得了SmFeAl三元化合物,对其晶体结构、吸氢性质以及磁学性质进行了研究。结果表明,SmFeAl在室温下具备吸收0.68 H/M的能力,氢气的吸收可以连续的改变磁化强度的轴向偏移的大小.
为了开发性能更优的汽车底漆自动沉积涂料，配制了热塑型和热固型自动沉积涂料，设计了一种复合自动沉积涂料涂装工艺并制备了自动沉积复合涂层漆膜，研究了自动沉积涂料主要成分乳
目的探讨动脉粥样硬化患者血清高敏C反应蛋白及单核细胞过氧化物酶增殖体激活型受体γ水平变化在动脉粥样硬化危险程度中的临床意义。方法采用酶联免疫法（ELSA）将动脉粥样硬化