【摘 要】
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目的 制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析.方法 构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)
【机 构】
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西北农林科技大学农药研究所,杨凌,712100陕西省进出口检验检疫局,西安,710068;西北农林科技大学农药研究所,杨凌 712100;植物源农药研究与开发陕西省重点实验室,杨凌 712100;
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目的 制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析.方法 构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达.可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用Factor Xa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定.scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析.结果 经0.1 mmol/L IPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-pET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体.经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30 kDa,效价为1:25600.同源半抗原Hap1对单链抗体scFv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL.结论 本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据.
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