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目的
研究羊膜培养液对小鼠角膜新生血管的抑制作用及机制。
方法应用corneal micropocket方法,将含100ng碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和12% hydron polymer的缓释颗粒植入角膜层间,制备小鼠角膜新生血管模型。实验分对照组、羊膜组和去上皮羊膜组,每组10只眼,收集各组培养液于模型制作当日起,每日滴眼4次至术后7d摄片观测角膜新生血管长人情况并处死动物。对脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)进行体外培养,并应用Boyden小房技术和荧光结合(CyQUANT)实验分别检测羊膜培养液对HUVEC细胞迁移和细胞增殖的影响。利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组培养液中金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)和2(TIMP2)的含量。
结果羊膜培养液明显抑制由bFGF诱发的小鼠角膜新生血管的形成,对照组、羊膜组和去上皮羊膜组角膜新生血管面积分别是(2.48±0.76)mm2、(0.64±0.52)mm2和(1.96±0.65)mm2。羊膜培养液明显抑制血管内皮细胞的迁移和增殖,而对照组和去上皮羊膜组对HUVEC细胞迁移无作用。羊膜培养液中TIMP2水平明显增高,而TIMP1的含量无变化。
结论羊膜培养液中TIMP1的含量未增加。而羊膜上皮产生或释放大量的TIMP2,抑制血管内皮细胞的迁移和增殖,其可能是羊膜培养液抑制角膜新生血管的作用机制之一。