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摘要：目的研究增液汤对便秘模型大鼠血清胃动素（MTL）和生长抑素（SS）含量的影响，在胃肠激素方面探讨增液汤治疗便秘的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、麻仁胶囊组、增液汤低、中、高剂量组。除正常组外，其余各组复方地芬诺酯混悬液灌胃复制大鼠便秘模型，模型成功后，分别给药7 d，于第8 d取腹主动脉血，ELISA法检测血清MTL、SS含量。结果与正常组相比较，模型组MTL含量明显下降（P<0.05），SS含量明显增加（P<0.01）。与模型组相比较，麻仁胶囊组可显著上调MTL含量（P<0.01），并明显下调其SS含量（P<0.05）。增液汤低、中、高剂量组MTL含量均明显高于模型组（P<0.05），SS含量均明显低于模型组（P<0.05，P<0.01）。结论增液汤通过调节血清MTL、SS的含量，以促进胃肠道蠕动，达到治疗便秘的目的。增液汤治疗便秘的作用机制可能与调控MTL、SS有关。
关键词：增液汤；便秘；胃动素；生长抑素
中图分类号：R-33文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）12-0061-03
【Abstract】Objective： To study the effect of Fluid-increasing Decoction on serum motilin （MTL） and somatostatin （SS） in constipation rats and explore the mechanism of Fluid-increasing Decoction in treating constipation. Methods： 60 SD rats were randomly divided into a normal group， a model group， a Maren capsule group and a Fluid-increasing Decoction groups with low， medium and high dose. Except the normal group， the other groups were intragastrically administrated with diphenoxylate suspension to replicate constipation rat models. After the models were made successfully and respectively given the drug for 7 days， and on the 8th day abdominal aorta blood was taken. ELISA was used to detect the content of serum MTL and SS. Results： Compared with that in the normal group， MTL content in model group decreased significantly （P<0.05） and SS content increased significantly （P<0.01）. Compared with that in the model group， MTL content in Maren capsule group significantly up-regulated （P<0.01）， and its SS content significantly down-regulated （P<0.05）. The MTL contents in Fluid-increasing Decoction groups with low， medium and high dose were significantly higher than those in model group （P<0.05）， and SS content was significantly lower than that in model group （P<0.05， P<0.01）. Conclusion： Fluid-increasing Decoction can regulate the content of serum MTL and SS to promote gastrointestinal motility and achieve the goal of treating constipation. The mechanism of Fluid-increasing Decoction for the treatment of constipation may be related to the regulation of MTL and SS.
【Key words】Fluid-increasing Decoction， constipation， motilin， somatostatin
便秘為临床常见病，病因复杂，发病机制尚未有统一标准。有关研究[1]已证实，正常人多种胃肠激素参与调节和影响结肠动力，其浓度变化与结肠动力关系密切，而且慢传输型便秘患者血中多种胃肠激素水平异常，与结肠动力障碍密切相关。增液汤出自清·吴鞠通的《温病条辨》，由玄参、生地、麦冬组成，具有增液润燥之功。本研究通过观察增液汤对便秘模型大鼠血清MTL、SS含量的影响，探讨其作用机制，为其临床治疗便秘提供科学依据。
1材料
1.1动物SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180～220 g，许可证号SCXK（湘）2013-0004。购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
1.2药物及试剂中药饮片玄参、生地、麦冬购于昆明东方药业有限公司；麻仁胶囊（湖南乐邦制药有限公司，国药准字：Z10880001）；复方地芬诺酯（常州康普药业有限公司，国药准字：H32022716）；大鼠血清胃动素ELISA试剂盒（南京森贝伽生物科技有限公司，货号：SBJ-R0507）；大鼠血清生长抑素ELISA试剂盒（南京森贝伽生物科技有限公司，货号：SBJ-R0023）。 1.3仪器连续波长酶标仪（美国Epoch公司）；高速离心机1580R（GeneSpeed公司）。
2实验方法
2.1增液汤水提浸膏制备称取所需中药饮片，置于煎煮容器中，按重量比加8倍药量的清水浸泡1 h，武火煮沸后开始计时，改为文火继续煎煮40 min后，经三层纱布过滤取汁。第二次和第三次煎煮均分别按重量比加以药量的6倍水，用相同方法煎煮40 min，以同样的方法取汁。三次滤液合并，浓缩成1 g含生药10 g的浸膏，置于4℃冰箱中保存备用。
2.2分组及造模SPF级SD大鼠60只，雌雄各半，随机分为正常组、模型组、麻仁胶囊组（0.37 g/kg）、增液汤高、中、低剂量组（20.8，10.4，5.2 g/kg），每组10只。
根据文献[2]报道方法进行大鼠便秘模型的复制，造模前大鼠禁食不禁水16 h，除正常组外，其余各组大鼠给予复方地芬诺酯混悬液10 mg/kg灌胃，每天一次，正常组给予等体积蒸馏水灌胃，连续4周。于造模第2周开始，记录大鼠体重及排便情况。造模4周后，各治疗组大鼠饮食减少，活动减少，大便量少，便粒干硬；正常组精神状态、二便正常。与正常组相比较，从第2周开始，各治疗组大鼠体重及排便粒数均低于正常组，第4周各治疗组大鼠体重及排便粒数与正常组比较，差异显著，确定便秘模型复制成功。
2.3药物干预模型成功后，进行药物干预，以成人每日临床用量作为等效剂量，按照人与实验动物的等效剂量折算法计算。增液汤以临床等效量作为中剂量，低剂量：中剂量：高剂量=1：2：4，增液汤各组按照5.2，10.4，20.8 g/kg灌胃不同剂量增液汤，麻仁胶囊组以成人每日临床用量作为等效剂量，按照人与实验动物的等效剂量折算法计算，灌胃0.37 g/kg麻仁胶囊混悬液，正常组和模型组灌胃蒸馏水正常饲养，给药7天。
2.4标本检测药物干预7天后，于第8天进行标本采集。大鼠禁食不禁水24h，10%水合氯醛3 mL/kg腹部注射麻醉，迅速剖开大鼠腹腔，充分暴露腹主动脉，取腹主动脉血5 mL，静置30 min后，离心，3000 r/min，4℃，15 min，离心结束，取血清作为待测标本，存放于-80℃冰箱中待用。后续操作严格按照试剂盒说明书进行，检测大鼠血清MTL、SS的蛋白浓度。
2.5统计方法实验数据用均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS22.0统计软件对数据进行统计分析，P<0.05差异有统计学意义。
3结果
3.1一般行为表现造模4周，药物干预1周，由于灌胃操作不当，大鼠死亡5只，收集标本过程中，由于实验操作不当，大鼠死亡6只。模型组大鼠饮食、活动、大便量均减少，且便粒干硬，正常组精神状态、二便正常。
3.2增液汤对便秘模型大鼠血清MTL含量的影响与正常组相比较，模型组MTL含量明显下降（P<0.05）。与模型组相比较，麻仁胶囊组可显著上调MTL含量（P<0.01）；增液汤低、中、高剂量组MTL含量均明显升高（P<0.05）。（结果见表1）
4讨论
便秘是临床多发病、常见病，主要表现为排便次数减少、持续排便费力、排便不尽感、粪便干硬等，严重影响着患者的生活质量。目前，许多学者[3-7]认为便秘的发生主要与肠神经系统异常、肠神经递质异常、Cajal间质细胞异常、胃肠激素异常等有关。
增液汤由玄参、生地、麦冬组成，具有滋阴润燥的功用，主治阳明温病，津亏便秘证。方中玄参可滋阴润燥，壮水制火，启肾水以滋肠燥。生地清热养阴，壮水生津，以增玄参滋阴润燥之力；麦冬滋养肺胃阴津以润肠燥。正如吴鞠通在《温病条辨·中焦篇》第11条自注云：“此方妙在寓泻于补，以补药之体作泻药之用，既可攻实，又可防虚。”
复方地芬诺酯为复方制剂，主要包含盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品，二者可通过减弱肠道蠕动，抑制肠道腺体分泌，造成肠内容物通过时间延长，肠道水分减少，从而复制便秘模型。
胃肠激素是由胃肠道内分泌细胞和神经细胞释放的一类小分子化学物质，广泛分布于人体内，是调节胃肠运动的重要物质，在便秘的发生发展中也有重要作用。其中MTL可在消化间期刺激胃和小肠的运动，对胃肠道运动起兴奋作用，研究显示[8]结肠MTL水平显著降低，可引起消化道平滑肌蠕动减弱、张力降低，传输时间延长，从而导致便秘的发生。SS则对胃肠运动有一定抑制作用，通过抑制胃肠平滑肌运动，延长肠道内容物通过时间，有研究证实[9]，SS通过影响结肠运动的兴奋性而导致便秘。
本实验采用增液汤干预便秘模型大鼠，研究结果亦表明，增液汤可明显上调血清MTL含量，下调血清SS含量。本课题前期研究发现增液汤可增加正常大鼠离体肠肌肌张力，缩短实验动物排便时间，促进排便。结合本实验研究结果，提示增液汤治疗便秘的作用机制可能是通过增加血清MTL含量，减少血清SS含量，以促进胃肠道蠕动，同时增加肠肌肌张力，以促使粪便快速通过肠道，缩短排便时间，从而达到治疗便秘的目的。
参考文献：
[1]焦俊，张兰花，曾曦，等.正常人及慢传输型便秘患者结肠动力学与胃肠激素的关系[J].贵阳医学院学报，2005，6：488-491.
[2]李业鹏，崔生辉，江涛，等.小鼠便秘模型的建立[J].中国食品卫生杂志，2000，12（1）：1-4.
[3]鲍旭，吴万春.慢传输型便秘发病机制的研究[J].国际消化病杂志，2013，33（6）：399-401.
[4]陈兰，刘诗.肠神经系统与慢传输型便秘[J].国际消化病杂志，2007，27（3）：178-179.
[5]张卫平，江滨.五羟色胺与慢性便秘[J].世界华人消化杂志，2011，（24）：2551-2554.
[6]夏旭婷，樊俊陽，易健，等.Cajal间质细胞在慢传输型便秘发病机制中的作用[J].湖南中医杂志，2014，（10）：172-174.
[7]宁月季，张蔚，林琳.功能性便秘与胃肠激素的关系[J].国际内科学杂志，2009，（7）：399-404.
[8]戴菲，罗金燕，龚均，等.不同分型功能性便秘患者结肠传输功能、胃肠激素以及一氧化氮合酶的研究[J].胃肠病学，2011，16（7）：419-422.
[9]张兰花，焦俊，郭晓山，等.慢传输型便秘患者结肠动力与胃肠激素的关系[J].临床消化病杂志，2005，（1）：17-19.
（收稿日期：2017-10-16）
关键词：增液汤；便秘；胃动素；生长抑素
中图分类号：R-33文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）12-0061-03
【Abstract】Objective： To study the effect of Fluid-increasing Decoction on serum motilin （MTL） and somatostatin （SS） in constipation rats and explore the mechanism of Fluid-increasing Decoction in treating constipation. Methods： 60 SD rats were randomly divided into a normal group， a model group， a Maren capsule group and a Fluid-increasing Decoction groups with low， medium and high dose. Except the normal group， the other groups were intragastrically administrated with diphenoxylate suspension to replicate constipation rat models. After the models were made successfully and respectively given the drug for 7 days， and on the 8th day abdominal aorta blood was taken. ELISA was used to detect the content of serum MTL and SS. Results： Compared with that in the normal group， MTL content in model group decreased significantly （P<0.05） and SS content increased significantly （P<0.01）. Compared with that in the model group， MTL content in Maren capsule group significantly up-regulated （P<0.01）， and its SS content significantly down-regulated （P<0.05）. The MTL contents in Fluid-increasing Decoction groups with low， medium and high dose were significantly higher than those in model group （P<0.05）， and SS content was significantly lower than that in model group （P<0.05， P<0.01）. Conclusion： Fluid-increasing Decoction can regulate the content of serum MTL and SS to promote gastrointestinal motility and achieve the goal of treating constipation. The mechanism of Fluid-increasing Decoction for the treatment of constipation may be related to the regulation of MTL and SS.
【Key words】Fluid-increasing Decoction， constipation， motilin， somatostatin
便秘為临床常见病，病因复杂，发病机制尚未有统一标准。有关研究[1]已证实，正常人多种胃肠激素参与调节和影响结肠动力，其浓度变化与结肠动力关系密切，而且慢传输型便秘患者血中多种胃肠激素水平异常，与结肠动力障碍密切相关。增液汤出自清·吴鞠通的《温病条辨》，由玄参、生地、麦冬组成，具有增液润燥之功。本研究通过观察增液汤对便秘模型大鼠血清MTL、SS含量的影响，探讨其作用机制，为其临床治疗便秘提供科学依据。
1材料
1.1动物SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180～220 g，许可证号SCXK（湘）2013-0004。购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
1.2药物及试剂中药饮片玄参、生地、麦冬购于昆明东方药业有限公司；麻仁胶囊（湖南乐邦制药有限公司，国药准字：Z10880001）；复方地芬诺酯（常州康普药业有限公司，国药准字：H32022716）；大鼠血清胃动素ELISA试剂盒（南京森贝伽生物科技有限公司，货号：SBJ-R0507）；大鼠血清生长抑素ELISA试剂盒（南京森贝伽生物科技有限公司，货号：SBJ-R0023）。 1.3仪器连续波长酶标仪（美国Epoch公司）；高速离心机1580R（GeneSpeed公司）。
2实验方法
2.1增液汤水提浸膏制备称取所需中药饮片，置于煎煮容器中，按重量比加8倍药量的清水浸泡1 h，武火煮沸后开始计时，改为文火继续煎煮40 min后，经三层纱布过滤取汁。第二次和第三次煎煮均分别按重量比加以药量的6倍水，用相同方法煎煮40 min，以同样的方法取汁。三次滤液合并，浓缩成1 g含生药10 g的浸膏，置于4℃冰箱中保存备用。
2.2分组及造模SPF级SD大鼠60只，雌雄各半，随机分为正常组、模型组、麻仁胶囊组（0.37 g/kg）、增液汤高、中、低剂量组（20.8，10.4，5.2 g/kg），每组10只。
根据文献[2]报道方法进行大鼠便秘模型的复制，造模前大鼠禁食不禁水16 h，除正常组外，其余各组大鼠给予复方地芬诺酯混悬液10 mg/kg灌胃，每天一次，正常组给予等体积蒸馏水灌胃，连续4周。于造模第2周开始，记录大鼠体重及排便情况。造模4周后，各治疗组大鼠饮食减少，活动减少，大便量少，便粒干硬；正常组精神状态、二便正常。与正常组相比较，从第2周开始，各治疗组大鼠体重及排便粒数均低于正常组，第4周各治疗组大鼠体重及排便粒数与正常组比较，差异显著，确定便秘模型复制成功。
2.3药物干预模型成功后，进行药物干预，以成人每日临床用量作为等效剂量，按照人与实验动物的等效剂量折算法计算。增液汤以临床等效量作为中剂量，低剂量：中剂量：高剂量=1：2：4，增液汤各组按照5.2，10.4，20.8 g/kg灌胃不同剂量增液汤，麻仁胶囊组以成人每日临床用量作为等效剂量，按照人与实验动物的等效剂量折算法计算，灌胃0.37 g/kg麻仁胶囊混悬液，正常组和模型组灌胃蒸馏水正常饲养，给药7天。
2.4标本检测药物干预7天后，于第8天进行标本采集。大鼠禁食不禁水24h，10%水合氯醛3 mL/kg腹部注射麻醉，迅速剖开大鼠腹腔，充分暴露腹主动脉，取腹主动脉血5 mL，静置30 min后，离心，3000 r/min，4℃，15 min，离心结束，取血清作为待测标本，存放于-80℃冰箱中待用。后续操作严格按照试剂盒说明书进行，检测大鼠血清MTL、SS的蛋白浓度。
2.5统计方法实验数据用均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS22.0统计软件对数据进行统计分析，P<0.05差异有统计学意义。
3结果
3.1一般行为表现造模4周，药物干预1周，由于灌胃操作不当，大鼠死亡5只，收集标本过程中，由于实验操作不当，大鼠死亡6只。模型组大鼠饮食、活动、大便量均减少，且便粒干硬，正常组精神状态、二便正常。
3.2增液汤对便秘模型大鼠血清MTL含量的影响与正常组相比较，模型组MTL含量明显下降（P<0.05）。与模型组相比较，麻仁胶囊组可显著上调MTL含量（P<0.01）；增液汤低、中、高剂量组MTL含量均明显升高（P<0.05）。（结果见表1）
4讨论
便秘是临床多发病、常见病，主要表现为排便次数减少、持续排便费力、排便不尽感、粪便干硬等，严重影响着患者的生活质量。目前，许多学者[3-7]认为便秘的发生主要与肠神经系统异常、肠神经递质异常、Cajal间质细胞异常、胃肠激素异常等有关。
增液汤由玄参、生地、麦冬组成，具有滋阴润燥的功用，主治阳明温病，津亏便秘证。方中玄参可滋阴润燥，壮水制火，启肾水以滋肠燥。生地清热养阴，壮水生津，以增玄参滋阴润燥之力；麦冬滋养肺胃阴津以润肠燥。正如吴鞠通在《温病条辨·中焦篇》第11条自注云：“此方妙在寓泻于补，以补药之体作泻药之用，既可攻实，又可防虚。”
复方地芬诺酯为复方制剂，主要包含盐酸地芬诺酯和硫酸阿托品，二者可通过减弱肠道蠕动，抑制肠道腺体分泌，造成肠内容物通过时间延长，肠道水分减少，从而复制便秘模型。
胃肠激素是由胃肠道内分泌细胞和神经细胞释放的一类小分子化学物质，广泛分布于人体内，是调节胃肠运动的重要物质，在便秘的发生发展中也有重要作用。其中MTL可在消化间期刺激胃和小肠的运动，对胃肠道运动起兴奋作用，研究显示[8]结肠MTL水平显著降低，可引起消化道平滑肌蠕动减弱、张力降低，传输时间延长，从而导致便秘的发生。SS则对胃肠运动有一定抑制作用，通过抑制胃肠平滑肌运动，延长肠道内容物通过时间，有研究证实[9]，SS通过影响结肠运动的兴奋性而导致便秘。
本实验采用增液汤干预便秘模型大鼠，研究结果亦表明，增液汤可明显上调血清MTL含量，下调血清SS含量。本课题前期研究发现增液汤可增加正常大鼠离体肠肌肌张力，缩短实验动物排便时间，促进排便。结合本实验研究结果，提示增液汤治疗便秘的作用机制可能是通过增加血清MTL含量，减少血清SS含量，以促进胃肠道蠕动，同时增加肠肌肌张力，以促使粪便快速通过肠道，缩短排便时间，从而达到治疗便秘的目的。
参考文献：
[1]焦俊，张兰花，曾曦，等.正常人及慢传输型便秘患者结肠动力学与胃肠激素的关系[J].贵阳医学院学报，2005，6：488-491.
[2]李业鹏，崔生辉，江涛，等.小鼠便秘模型的建立[J].中国食品卫生杂志，2000，12（1）：1-4.
[3]鲍旭，吴万春.慢传输型便秘发病机制的研究[J].国际消化病杂志，2013，33（6）：399-401.
[4]陈兰，刘诗.肠神经系统与慢传输型便秘[J].国际消化病杂志，2007，27（3）：178-179.
[5]张卫平，江滨.五羟色胺与慢性便秘[J].世界华人消化杂志，2011，（24）：2551-2554.
[6]夏旭婷，樊俊陽，易健，等.Cajal间质细胞在慢传输型便秘发病机制中的作用[J].湖南中医杂志，2014，（10）：172-174.
[7]宁月季，张蔚，林琳.功能性便秘与胃肠激素的关系[J].国际内科学杂志，2009，（7）：399-404.
[8]戴菲，罗金燕，龚均，等.不同分型功能性便秘患者结肠传输功能、胃肠激素以及一氧化氮合酶的研究[J].胃肠病学，2011，16（7）：419-422.
[9]张兰花，焦俊，郭晓山，等.慢传输型便秘患者结肠动力与胃肠激素的关系[J].临床消化病杂志，2005，（1）：17-19.
（收稿日期：2017-10-16）