【摘 要】
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建立黑斑原鮡（Glyptosternum maculatum）AFLP反应体系,对DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染效果进行了探索。结果表明,40μLTaqI酶切体系中65℃先酶切2h,EcoRI
【机 构】
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浙江海洋学院海洋科学学院浙江省海洋养殖装备与工程技术重点实验室,华中农业大学水产学院,浙江省大海洋科技有限公司
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建立黑斑原鮡（Glyptosternum maculatum）AFLP反应体系,对DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染效果进行了探索。结果表明,40μLTaqI酶切体系中65℃先酶切2h,EcoRI酶切和连接同时进行,EcoRI酶和T4DNA连接酶的用量均以2U为宜,温度与时间分别为37℃和3h,连接产物稀释10倍作为预扩增的模板。利用这种优化的反应体系,5对选择性扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是：E-AAC/T-AAT、E-AAC/T-AAG、E-AAG/T-AC
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