【摘 要】
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生物发光标记以其可视化,便捷,快速,灵敏,可用于活体研究等诸多优点越来越多地应用于科学研究中。本研究通过Ca Cl2方法将实验室构建的带有青海弧菌荧光素酶基因lux AB的重组
【机 构】
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西北农林科技大学食品科学与工程学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31172236);中央高校基本科研业务费(QN2011138)
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生物发光标记以其可视化,便捷,快速,灵敏,可用于活体研究等诸多优点越来越多地应用于科学研究中。本研究通过Ca Cl2方法将实验室构建的带有青海弧菌荧光素酶基因lux AB的重组质粒导入大肠杆菌Top10中,利用酶切和核酸电泳检测荧光素酶基因的存在,利用SDS-PAGE检测荧光素酶表达的情况,然后对其表达条件进行优化。单因素试验结果表明:在培养基初始pH值6.0,癸醛体积分数1.25‰,接种量1%,IPTG浓度0.1 mmol/L,装液量50 m L/150 m L,温度37℃条件下,重组菌的发光度最大,即表达量最高。正交试验结果表明:当pH 6,IPTG浓度0.08 mmol/L,接种量1.2%,温度36℃时重组大肠杆菌表达情况最好,发光度达1 262.7。本研究中的重组大肠杆菌为在益生菌等食品微生物中的应用提供技术依据。
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