【摘 要】
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目的 探讨AMPK在华蟾素(cinobufagin,CBG)诱导结直肠癌HCT116细胞发生免疫原性死亡的作用.方法 体外培养结直肠癌HCT116细胞,并将细胞分为对照组、CBG组、CBG+AMPK抑制剂组(抑制剂组)和CBG+AMPK siRNA干扰组(干扰组);用MTT法检测细胞增殖,LIVE/DEADTM Viability/Cytotoxicity Kit试剂盒观察细胞死亡情况,流式细胞仪技术检测细胞凋亡比例、钙网蛋白(calreticulin,CRT)含量,ELISA法检测培养基中HMGB1含量
【机 构】
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温州医科大学附属第五医院肛肠外科,浙江丽水323000
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目的 探讨AMPK在华蟾素(cinobufagin,CBG)诱导结直肠癌HCT116细胞发生免疫原性死亡的作用.方法 体外培养结直肠癌HCT116细胞,并将细胞分为对照组、CBG组、CBG+AMPK抑制剂组(抑制剂组)和CBG+AMPK siRNA干扰组(干扰组);用MTT法检测细胞增殖,LIVE/DEADTM Viability/Cytotoxicity Kit试剂盒观察细胞死亡情况,流式细胞仪技术检测细胞凋亡比例、钙网蛋白(calreticulin,CRT)含量,ELISA法检测培养基中HMGB1含量,Western blotting方法检测AMPK、磷酸化的AMPK(p-AMPK)的表达水平.结果 2.5,5,10,25,50,100,250,500 nmol·L-1的CBG处理48 h后,细胞增殖抑制率显著增加,IC50为(53.03±5.36)nmol·L-1.25,50 nmol·L-1的CBG显著增加p-AMPK表达.与对照组比较,CBG组细胞凋亡比例、cleaved-caspase 3表达、CRT和HMGB1含量增加,Bcl-2表达下降;与CBG组相比,抑制剂组和干扰组细胞凋亡比例、cleaved-caspase 3表达、CRT和HMGB1含量明显下降,Bcl-2表达增加.结论 CBG通过激活AMPK诱发免疫原性死亡,抑制结直肠癌细胞的增殖.
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