红皮香蕉CHS基因的克隆和表达模式分析

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为研究查尔酮合成酶基因(CHS)在红皮香蕉(Musa acuminata ’Red Green’ (AAA))果实花青素生物合成过程中的作用,探究红皮香蕉中查尔酮合成酶(CHS)的生物学作用,为红皮香蕉果实颜色形成的分子机制研究奠定基础。以小果野蕉(Musa acuminata)基因组为参考,对红皮香蕉(Musa acuminata ’Red Green’ (AAA))和天宝香蕉(Musa spp., AAA Group)进行差异转录组分析,结果中筛选出4个CHS差异表达基因,分别命名为MaCHS2-1,MaCHS2-2,MaCHS2-3,MaCHS2-4,将其克隆出来并进行生物信息学分析,以及不同的组织中的表达模式分析。结果表明:这4个MaCHS基因长度均为1 200 bp左右,均可以编码392个氨基酸,不存在任何信号肽,均属于非分泌蛋白。4个MaCHS的基因结构,保守基序高度相似,是查尔酮合成酶超家族成员。启动子中均含有与查尔酮合成酶调控功能相关的顺式作用元件,包括脱落酸响应元件(ABRE),MYB转录因子结合位点顺式元件,MYC转录因子结合位点顺式元件等。系统进化关系显示4个MaCHS蛋白亲缘关系非常很近,与芭蕉科(Musaceae),姜科(Zingiberaceae)植物进化关系较近,与禾本科(Gramineae)进化关系相对较远。实时定量PCR研究结果显示,4个MaCHS基因在红皮香蕉不同组织中的表达量均高于天宝香蕉,其中MaCHS2-1,MaCHS2-2在红皮香蕉果肉中表达量最高,MaCHS2-3,MaCHS2-4在红皮香蕉果皮中表达量最高。本研究表明MaCHS基因结构相似性很高,编码蛋白理化性质,空间结构相似,结构域高度保守,推测4个MaCHS基因发挥相似的功能,属于同一家族基因,其在红皮香蕉和天宝香蕉中的差异表达可能是红皮香蕉中花青素合成积累的重要原因。
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