目的 构建含有TβRⅡDNglytk的慢病毒质粒载体，生产出相应的慢病毒，用于对TGF—β失敏感的CTL的制备。方法先以原始质粒为模板，PCR扩增TβRⅡDN和HSV—tk基因，用重组PCR方法获得TβRⅡDNglytk融合基因，用PCR扩增出TRANSglytk基因；再用TOPO克隆技术将其连接到慢病毒表达质粒，经测序验证；最后用Invitrogen公司提供的ViraPowerTMLentiviralSystem和293细胞合成慢病毒，并用293细胞完成其滴度测定。结果完成慢病毒质粒TβRⅡDNglytk的构建，经测序验证序列正确；生产的慢病毒具有感染能力，其滴度达到实验要求，叮用于对TGF—B不敏感的肿瘤特异性CTL的制备。结论运用重组PCR技术合成TβRⅡDNglytk及TRANSglytk两个融合基因，并用TOPO克隆技术连接到pLenti6／V5-D-TOPO载体，成功构建了慢病毒表达载体，说明此方法用于病毒载体的构建是快捷可行的；用ViraPowerTMLentiviralSystem和293FT细胞成功制备了慢病毒，为生产TGF—B不敏感的人肿瘤特异性CTL提供了基础。