【摘 要】
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目的:构建含Egr-1启动子和Smad7 cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并初步验证其活性,为下一步的基因治疗奠定基础.方法:以Adeno-XTM表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质粒
【机 构】
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复旦大学附属肿瘤医院放射治疗科,复旦大学教育部分子医学重点实验室
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目的:构建含Egr-1启动子和Smad7 cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并初步验证其活性,为下一步的基因治疗奠定基础.方法:以Adeno-XTM表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为Egr-1启动子,再将Smad7 cDNA亚克隆至穿梭质粒内,然后与腺病毒DNA重组,转化大肠杆菌E.coli DH5α,PCR鉴定正确即为pAdES.脂质体法转染HEK293细胞,包装出完整腺病毒,然后大量扩增测定滴度.重组腺病毒感染成纤维细胞(3T6),经深部X线照射后通过免疫细
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