【摘 要】
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目的 探讨三叶因子3(TFF3)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗
【机 构】
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河北北方学院形态学实验室,河北张家口075000;河北北方学院耳鼻咽喉头颈外科教研室,河北张家口075000
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目的 探讨三叶因子3(TFF3)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细胞系以及增强对照组细胞系ConTFF3-TPC-1;构建抑制TFF3表达的shRNA-TFF3-TPC-1细胞系以及沉默对照组细胞系shCon-TPC-1;利用Western blotting实验与Real-time PCR验证TFF3过表达和沉默效率;生长曲线和集落形成实验检测4组细胞增殖状况;流式细胞术检测4组细胞凋亡情况;Western blotting和免疫细胞化学染色检测凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、核因子-κB (NF-κB)通路蛋白表达水平.结果 1.成功构建TFF3过表达和抑制表达稳转细胞系TFF3-TPC-1及细胞系shRNA-TFF3-TPC-1;2.TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显高于ConTFF3-TPC-1组(P＜0.05或P＜0.01),shRNA-TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显低于shCon-TPC-1组(P＜0.01);3.TFF3-TPC-1细胞凋亡率低于ConTFF3-TPC-1(0.75％±0.08％ vs 5.62％±0.3％,P＜0.01),shRNA-TFF3-TPC-1凋亡率高于shCon-TPC-1(22.2％±1.2％vs 5.34％±0.4％,P＜0.01);4.沉默TFF3基因后,Bax、细胞色素C(Cyt-C)、cleaved-Caspase-9、cleaved-Caspase-3表达升高,Bcl-2、通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB-P65表达降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 TFF3可能通过影响PI3 K/Akt/NF-κB信号通路调节TPC-1细胞的增殖和凋亡.
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