【摘 要】
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目的 构建日本血吸虫(Schistosoma japonic um,Sj)重组质粒pGEX-Sj26GST,并研究其在大肠埃希菌(Escheric hia coli,E.coli BL21 (DE3)中的表达.方法 使用RNeasy Mini试剂盒提取sj成虫总RNA,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)扩增日本血吸虫26 kDa的谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)编
【机 构】
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400016重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,400016重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,400016重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所
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目的 构建日本血吸虫(Schistosoma japonic um,Sj)重组质粒pGEX-Sj26GST,并研究其在大肠埃希菌(Escheric hia coli,E.coli BL21 (DE3)中的表达.方法 使用RNeasy Mini试剂盒提取sj成虫总RNA,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)扩增日本血吸虫26 kDa的谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)编码基因,并将扩增产物定向克隆到pGEX-1λT载体上,构建重组质粒pGEX-Sj26GST;将重组质粒电穿孔转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物及蛋白印迹(Western blot)试验鉴定表达的融合蛋白的抗原性.结果 RT-PCR扩增出676 bp大小的Sj26GST抗原编码基因;双酶切试验证实Sj26GST抗原编码基因成功克隆到pGEX-1λT载体中;SDS-PAGE分析出现相对分子质量(Mr)约52×103的融合蛋白,薄层扫描分析显示表达的融合蛋白约占总菌体蛋白的20％,Western blot结果显示融合蛋白可被Sj感染的兔血清识别.结论 成功构建重组质粒pGEX-Sj26GST,其在大肠埃希菌BL21(DE3)中可获得表达,且表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
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