【摘 要】
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目的研究正向和反向SV40poly（A）信号在3种常用细胞株中对上游基因表达的调控作用,为基因表达研究中载体poly（A）信号的选择提供依据。方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Luc基因后分别插入正向和反向互补的SV40poly（A）信号序列,得到2个带有不同SV40poly（A）信号的载体Dual-Luc2、Dual
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划重点项目（“863计划”,2007AA021108）～～；
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目的研究正向和反向SV40poly（A）信号在3种常用细胞株中对上游基因表达的调控作用,为基因表达研究中载体poly（A）信号的选择提供依据。方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Luc基因后分别插入正向和反向互补的SV40poly（A）信号序列,得到2个带有不同SV40poly（A）信号的载体Dual-Luc2、Dual-Luc3。将其分别转染常用的3类细胞株293、L-02和HeLa细胞,应用双荧光素酶标仪和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定报告基因（F-Luc）的表达量,以R-Luc基因的表达量作对照。结果成功构建携带正向和反向互补SV40poly（A）序列的双荧光素酶载体Dual-Luc2、Dual-Luc3;双荧光素酶标仪检测表明,在293细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为3.25±0.43、3.03±0.14,差异无统计学意义（P>0.05）;在L-02细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为6.16±0.39、3.83±0.39,差异有统计学意义（P<0.05）;在HeLa细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为1.21±0.10、0.66±0.02,差异有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR检测与荧光素酶检测结果一致。结论不同细胞中poly（A）信号序列对上游基因的调控作用存在差异;poly（A）信号对上游基因的调控作用主要发生于转录水平。
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