【摘 要】
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目的 探索淫羊藿苷元治疗血小板减少症的直接作用靶点及作用机制.方法 从BALB/c小鼠股骨中分离得到原代骨髓细胞,利用键合淫羊藿苷元的琼脂糖微球捕获并鉴定靶点蛋白,使用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术进行靶点确证;采用Western blotting检测淫羊藿苷元对胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS1)/蛋白激酶B (protein kinaseB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian targ
【机 构】
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北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京 100191;鲁南制药集团股份有限公司中药制药共性技术国家重点实验室,山东临沂276006
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目的 探索淫羊藿苷元治疗血小板减少症的直接作用靶点及作用机制.方法 从BALB/c小鼠股骨中分离得到原代骨髓细胞,利用键合淫羊藿苷元的琼脂糖微球捕获并鉴定靶点蛋白,使用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术进行靶点确证;采用Western blotting检测淫羊藿苷元对胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS1)/蛋白激酶B (protein kinaseB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/糖原合成酶激酶3β (glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)、Hippo、细胞周期、Janus激酶(Janus kinase,JAK)/信号转导与转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)和核因子-KB (nuclear factor-κB,NF-κB)通路相关蛋白的调控作用;通过流式细胞术检测淫羊藿苷元对巨核细胞系分化的影响.结果 共发现20个与造血干细胞增殖分化功能密切相关的靶点蛋白,且淫羊藿苷元可能通过作用于泛素羧基末端酯酶L5 (ubiquitin carboxyl-terminal esterase L5,UCHL5)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor α-induced protein 8,TNFAIP8)、Visfatin靶点,进而激活IRS 1/Akt/mTOR/GSK3β和细胞周期通路,并抑制Hippo、JAK/STAT和NF-κB通路,最终促进巨核细胞的分化.结论 淫羊藿苷元通过UCHL5、TNFAIP8、Visfatin等多靶点治疗血小板减少症.
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