重组嗜热乳糖酶在毕赤酵母中的表达、纯化与活性分析

来源 :食品与生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qb54223322
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为获得耐高温的重组乳糖酶,PCR扩增激烈热球菌(Pyrococcus furious)乳糖酶基因、构建毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/Lac并转化毕赤酵母X-33菌株。重组酵母转化子经甲醇诱导,重组嗜热乳糖酶实现了分泌表达并经蛋白印迹验证。纯化前上清液中乳糖酶总活力高达125U/mL,经镍亲合纯化得重组酶,SDS-PAGE显示其纯度在95%以上,比活力1800U/mg,该酶最适温度在105℃左右且热稳定性好,具有很强的水解乳糖能力。
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