血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响

来源 :中国危重病急救医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tanmh
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目的 探讨血红素加氧酶-1 (HO-1)对过氧化氢(H2O2)氧化损伤肺泡Ⅰ型上皮细胞(AEC Ⅰ)凋亡以及线粒体跨膜电位(MTMP)的影响.方法 将24只健康雄性SD大鼠腹腔注射麻醉处死后取肺,分离纯化AEC Ⅰ接种于培养板,原代培养24 h后等量分为正常对照组、H2O2损伤组、HO-1保护组、HO-1抑制组4组.采用0.5 mmol/L H2O2刺激AEC Ⅰ 2.5 h建立细胞氧化损伤模型.制模后用0.2μmol/L HO-1或20μmol/L锌原卟啉Ⅸ处理给予保护或抑制.处理2.5h后用荧光显微镜观察细胞的形态学变化;分别于处理0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h5个时间点用流式细胞仪检测细胞凋亡率及MTMP去极化比例的变化.结果 荧光显微镜下观察.:H2O2损伤组可见大量呈绿色(凋亡早期)、红色(凋亡中晚期)荧光的凋亡细胞;HO-1保护组所见绿色或红色荧光细胞明显减少;HO-1抑制组与H2O2损伤组镜下所见相似.流式细胞仪检测结果显示:与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞凋亡率增加,且随H2O2作用时间延长逐渐增加,2.5h达峰值[0.5 h:(30.27±0.74)%比(3.76±0.81)%,2.5 h:(40.46±0.91)%比(22.74±0.60)%,均P<0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.99±0.21比1.91±0.16,P<0.05);与H2O2损伤组比较,HO-1保护组AEC Ⅰ细胞凋亡率明显降低[0.5 h:(5.99±0.60)%比(30.27±0.74)%,2.5h:(22.69±1.69)%比(40.46±0.91)%,均P<0.05],MTMP去极化比例明显升高(2.02±0.12比0.99±0.21,P<0.05);与HO-1保护组比较,HO-1抑制组细胞凋亡率明显增加[0.5 h:(30.73±1.08)%比(5.99±0.60)%,2.5h:(41.38±0.57)%比(22.69±1.69)%,均P<0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.98±0.09比2.02±0.12,P<0.05).结论HO-1可保护AEC Ⅰ细胞完整性,降低细胞凋亡率并且稳定MTMP,对H2O2所致大鼠AEC Ⅰ氧化损伤具有一定的保护作用.
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