植酸酶基因的多点突变及在毕赤酵母中的高效表达

来源 :中国生物工程杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：superheron

【摘要】

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根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性，不改变其编码氨基酸序列，对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变，构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9k-phyA^m4，电击转化毕赤酵母，

【作者】

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许钦坤王红宁李洪淼

【机构】

：

四川农业大学动物科技学院,韶关学院英东生物工程学院

【出处】

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中国生物工程杂志

【发表日期】

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2006年5期

【关键词】

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植酸酶多点突变毕赤酵母高效表达 Phytase Muhipoint mutation Pichia pastoris Over-expression

【基金项目】

：

国家“十五”重点科技攻关资助项目（2002BA514A-12）

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根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性，不改变其编码氨基酸序列，对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变，构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9k-phyA^m4，电击转化毕赤酵母，获得优化了密码子的重组酵母转化子。经PCR鉴定表明，植酸酶基因已整合到酵母基因组中；表达产物的SDS—PAGE分析表明，酶蛋白分子大小为70．15kDa。Southern blotting结果表明，phyA基因整合到酵母染色体DNA中；转化子酶活测定结果表明，经密码子优化的重组酵母PP—N^m4-2酶活可达136900

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