目的：研究半枝莲石油醚提取物对EGF诱导的人三阴性乳腺癌细胞株（MDA-MB-231）Ezrin和Rho A蛋白表达的影响，探讨其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、分化的作用机制。方法：溶剂萃取法获得半枝莲石油醚提取物，通过Agilent HPLC-ESI-Q-TOF-MS MassHunter软件分析，于PubChem数据库中获取半枝莲石油醚提取物熊果酸的分子对接信息。采用分子对接技术对半枝莲石油醚提取物中熊果酸与Rho A蛋白受体的对接进行可视化分析。为探讨其抑制肿瘤细胞的分化、增殖机制，取对数生长期细胞分为7组，用含2%胎牛血清培养液进行饥饿培养24 h，给予30 ng/mL EGF分别干预30 min、24 h后，分别给予相应药物培养30 min，采用Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中Rho A、p-RhoA及Ezrin蛋白表达情况。结果：质谱分析显示，半枝莲石油醚提取物中主要包括长链脂肪酸和萜类成分。生物信息分子对接发现，熊果酸是半枝莲调控Rho A的有效活性成分。Western blotting结果显示，EGF诱导MDA-MB-231细胞30 min及24 h后p-RhoA和Ezrin蛋白相对表达量均明显升高（P＜0.05）；经Fasudil和半枝莲石油醚提取物干预30 min后，MDA-MB-231细胞p-RhoA和Ezrin蛋白相对表达量均明显降低（P＜0.05）;7组MDA-MB-231细胞Rho A蛋白相对表达量比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。EGF可能以Rho A蛋白磷酸化的形式参与下游蛋白信号调控，增强肿瘤癌细胞中Ezrin蛋白表达，进而促进癌细胞侵袭和转移。结论：熊果酸是半枝莲调控Rho A的有效活性成分。半枝莲石油醚提取物可通过Rho A信号通路抑制MDA-MB-231细胞的增殖、转移和分化，进而对人三阴性乳腺癌起到治疗作用。