【摘 要】
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目的 探讨机械-酶消化法对小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)细胞残留量及生长因子含量的影响. 方法 取4 h内市售新鲜猪空肠,采用机械处理(去除浆膜层、黏膜层及
【机 构】
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四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室,成都,610041;北京德得创业科技有限公司
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目的 探讨机械-酶消化法对小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)细胞残留量及生长因子含量的影响. 方法 取4 h内市售新鲜猪空肠,采用机械处理(去除浆膜层、黏膜层及肌层)、脱脂、胰蛋白酶消化、去垢剂处理及冻干5个步骤制备SIS.每步操作后留取样品(n=4),分别作为A、B、C、D、E组;以新鲜猪空肠作为对照(n=4,F组).HE染色及扫描电镜观察组织学变化;采用Nest-PCR技术测定死亡相关蛋白12(deach associated protein 12,DAP12)含量;ELISA法检测VEGF、bFGF、TGF-β和TNF-α的含量. 结果 组织学及扫描电镜观察显示A、B组有细胞残留,C、D、E组未见细胞残留.Nest-PCR检测示各组均含有DAP12;A～F组DAP12拷贝数分别为(18.01±9.53)、(11.87±2.35)、(0.59±0.27)、(0.29±0.05)、(0.19±0.04)、(183.50±120.13)copy×10~6/cm~2.F组DAP12含量显著高于A～E组(P<0.05),A、B组高于C、D、E组(P<0.05),C、D、E组间比较差异有统计学意义(P0.05).ELISA法检测示A组VEGF、bFGF、TGF-β及TNF-α含量均显著高于其他各组(P0.05). 结论 单纯采用机械法制备SIS有较多细胞残留;机械-酶消化法能有效去除细胞,显著降低DAP12含量,生长因子含量无明显改变.
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