探讨槲皮素对宫颈癌细胞中乙酰肝素酶 (HPA) 表达的影响。

免疫荧光法检测宫颈癌细胞系HeLa、Caski细胞中HPA蛋白的表达。实验分为3组,槲皮素组:在HeLa、Caski细胞中加入含不同浓度 (20、40、80μmol/L) 槲皮素的RPMI 1640培养基;阳性对照组:小分子RNA (siRNA) 转染HeLa、Caski细胞沉默其HPA的表达后,加入RPMI 1640培养基;空白对照组:在HeLa、Caski细胞中仅加入RPMI 1640培养基。3组HeLa、Caski细胞分别培养24、48、72 h后,采用实时定量PCR技术和蛋白印迹法检测其HPA mRNA和蛋白的表达。

(1) 免疫荧光法检测显示,HeLa和Caski细胞中均有HPA蛋白的表达,均位于细胞核与细胞质中,呈红色荧光。 (2) 实时定量PCR技术检测显示,槲皮素组HeLa、Caski细胞中HPA mRNA的表达水平均随槲皮素浓度 (分别为20、40、80μmol/L) 的升高、处理时间 (分别为24、48、72 h) 的延长而明显下降 (P<0.01),呈浓度和时间依赖性。与空白对照组相比,槲皮素组中40、80μmol/L槲皮素处理后HeLa、Caski细胞中HPA mRNA表达水平均明显下降 (P<0.05) ;与阳性对照组相比,槲皮素组中80μmol/L槲皮素处理后HeLa细胞中HPA mRNA表达水平无明显变化 (P>0.05),而Caski细胞中HPA mRNA表达水平明显升高 (P<0.01) 。 (3) 蛋白印迹法检测显示,槲皮素组HeLa、Caski细胞中HPA蛋白的相对表达水平均随槲皮素浓度 (分别为20、40、80μmol/L) 的升高、处理时间 (分别为24、48、72 h) 的延长而明显下降 (P<0.01),呈浓度和时间依赖性。与空白对照组相比,槲皮素组中40、80μmol/L槲皮素处理后HeLa、Caski细胞中HPA蛋白表达水平明显下降 (P<0.05) ;与阳性对照组相比,槲皮素组中80μmol/L槲皮素处理后HeLa、Caski细胞HPA蛋白表达水平无明显变化 (P>0.05) 。

槲皮素对宫颈癌细胞中HPA mRNA和蛋白的表达均有明显抑制作用,且这种抑制作用与槲皮素浓度与处理时间均呈明显依赖关系。