【摘 要】
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将苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B与耐盐有关的4kb Cla Ⅰ DNA片段克隆在pML122上,用HindⅢ酶切下其2.4kb DNA片段,回收后与pBBR1-MCS2连接,然后转化大肠杆菌(E
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将苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B与耐盐有关的4kb Cla Ⅰ DNA片段克隆在pML122上,用HindⅢ酶切下其2.4kb DNA片段,回收后与pBBR1-MCS2连接,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,筛选到转化子GS2.将残留在pML122上1.6kb Cla Ⅰ-HindⅢDNA片段连同质粒一起回收,让其自连,转化大肠杆菌S17-1,得到转化子GS0.以GS0为供体,042B的盐敏感突变株GZ17为受体,进行二亲本杂交,没有得到接合子.以GS2为供体,GZ17为受体,在辅助质粒pRK2013的协助下,进行三亲本杂交,筛选到接合子GG2,获得2.4kb Hind Ⅲ与耐盐有关的DNA片段.将此片段连接到测序载体pGEM-7Zf(+)上进行测序.测序结果表明,该2.4kb HindⅢDNA片段含有3个开放阅读框(ORF).在此基础上再一次亚克隆,获得1.9kb 与耐盐有关的DNA片段.
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