免疫亲和层析法制备高纯凝血因子IX和缺凝血因子IX人基质血浆

来源 :中华血液学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:s334794681
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研制一种对连接钙(或镁)离子的因子IX (FIX)之构型具有特异性的单克隆抗体(McAb),并将其偶联Affi-Gel 15凝胶,组成亲和层析柱。可供制备高纯凝血因子IX和理想的缺FIX基质血浆(FIXDP),是血友病B的诊断试剂。用lmmol/L EDTA洗脱层折柱就得到十分陡峭的FIX洗脱峰,其FIX极纯,在SDS-PAGE银染色的图谱上呈现一条谱带。比活性为140~180U/mg蛋白,接近理论水平。FIX活性回收率达90%。

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应用纤维蛋白原、因子XIII,凝血酶等制备出交联纤维蛋白,经纤溶酶水解,通过Sephacryl S 300凝胶过滤制备得D-二聚体粗品,并用此制备出单克隆抗体,用PBE 94柱进行聚焦层析,得到D-二聚体精品,经PAGE检测为单一条带。另外,利用纤维蛋白原酶解经QAE-SePhadex A 50柱层析得到D、E碎片,还建立了酶标免疫分析方法(ELISA)。
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作者通过对大白鼠静脉注射荧光素钠的同时,利用荧光显微镜激发的荧光照射大白鼠活体肠系膜微血管网,从而诱发起微血栓,建立了活体的微血栓形成实验模型。整个实验过程经生物显微电视系统观察和录像,将所得图象经计算机图象采集系统读入,数字化后,用计算机图象处理技术处理,定量算出血栓面积的大小和体积。本研究对研究血栓形成过程及定量评价抗血小板凝聚药物的效果是十分有用的。
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