【摘 要】
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目的 探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因PstB两种不同耐药机制的作用.方法 从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧
【机 构】
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中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心办公室,中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心参比实验室,中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会与比尔及梅琳达·盖茨基金会结核病防治项目办公室
【基金项目】
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中国卫生部-比尔及梅琳达·盖茨基金会结核病防治项目
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目的 探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因PstB两种不同耐药机制的作用.方法 从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧氟沙星的菌株17株.采用直接测序法检测利福平耐药相关基因gyrA和gyrB突变情况.提取gyrA和gyrB无突变菌株的RNA后反转录并采用Real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度(MIC)试验结果,筛选可能与氧氟沙星药物外排泵的相关基因,并选用大肠埃希菌为模式生物构建表达载体,检测过表达目的外排泵蛋白的大肠埃希菌对氧氟沙星的耐药程度加以验证.结果 在17株单耐氧氟沙星的菌株中,有4株(4/17)检测到gyrA突变,其中包括90位点突变1株及94位点突变3株,上述突变均表现为高浓度耐药,其MIC均不低于4μg/ml.在gyrA和gyrB未突变菌株中,通过real-time PCR检测发现在高浓度耐药的2株菌株中,Rv0933和Rv2938的转录水平显著高于其他低浓度耐药菌株,较对照株H37Rv转录水平高16倍和5倍.在对照组和转入pEASY-E1-Rv2938的大肠埃希菌中MIC均小于0.125 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌的MIC为2μg/ml.结论 本研究结果显示,gyrA耐药决定区基因突变与氧氟沙星高浓度耐药相关,RstB可能是氧氟沙星特异性的药物外排泵基因,其高水平表达与氧氟沙星高浓度耐药相关.
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