【摘 要】
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大豆疫霉侵染大豆引起的根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一.本研究以Ypt1基因作为靶标,利用环介导等温扩增(LAMP)技术,设计了特异性检测体系,整个过程仅需60min,即可通过肉
【机 构】
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南方现代林业协同创新中心,南京农业大学植物保护学院卵菌与真菌分子生物学实验室
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大豆疫霉侵染大豆引起的根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一.本研究以Ypt1基因作为靶标,利用环介导等温扩增(LAMP)技术,设计了特异性检测体系,整个过程仅需60min,即可通过肉眼直接目测检测结果.反应后经浊度仪验证浊度变化、琼脂糖凝胶进行电泳验证和在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂验证扩增结果.特异性检测中,111个大豆疫霉菌株均能产生浊度曲线和扩增到梯形状的条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而其它疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象;在灵敏度检测中,Ps Ypt1-LAMP技术最低检测限达到100 pg·μL-1,比普通PCR技术的最低检测限高出10倍;在田间应用方面,PsYpt1-LAMP检测技术明显提高了检测效率.本研究建立的LAMP检测体系可用于口岸和田间对大豆疫霉的快速检测.
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