论文部分内容阅读
摘要:目的: 探讨活化部分凝血活酶时间(APTT)的标准化问题。方法: 采用6种市售进口试剂检测不同水平凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅹ Ⅱ及不同肝素水平血浆的APTT。结果: 不同APTT试剂对含不同水平凝血因子血浆及肝素的敏感度不同。APTT的结果若以秒表示,同组标本不同试剂的结果有显著的差异。若以比值报告,结果无显著性差异。结论: 不同的检测目的宜选用不同APTT试剂;测定结果以APTT比值形式报告较好。
关键词: 活化部分凝血活酶时间; 标准化
中图分类号: R446.11 文献标识码: A
文章编号:1001-2087(2000)05-0291-02
活化部分凝血活酶时间 (activated partial thromboplastin time, APTT) 是内源凝血系统最常用的筛选试验。有关APTT检测标准化的报道很少,我对该问题进行了探讨。
材料和方法
一、 材料
1.仪器 ACL 3000 plus 全自动血液凝固仪 (Beckman-Coulter 公司)。
2.主要试剂 (1) APTT试剂:分别为 a.Automated APTT, Organon 产品;b.Silimat, Biomerieux 产品;c.Kontact, Pacific 产品;d.APTT Lyophilized silica, Beckman-Coulter产品; e.Actin, f.Actin-Fs, 均为 Behring 产品。(2) 缺乏因子 Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅹ Ⅱ血浆:均由 Dade Behring提供。(3) 定标血浆:由 Beckman Coulter 公司提供。(4) 肝素标准液:上海生化制药厂提供。(5) 肝素检测试剂:Stago 公司提供。
3.标本 正常人组:53例,年龄18~55岁,男26例,女27例,均为健康献血员。
二、 方法
1.配制不同FⅧ:C活性水平的血浆 用定标血浆1 ml(FⅧ:C为100%)对倍稀释乏FⅧ:C血浆,制成FⅧ:C活性为100%~1.56%的检测血浆。
FⅨ、FⅪ、FⅩ Ⅱ检测血浆的同样配制。
2.配制含不同浓度肝素的血浆 将肝素标准品按比例加入定标血浆中,制成肝素浓度为1~0.0156(IU/ml)的待检血浆。
3.ACL 3000 plus 全自动血凝仪分别检测各组的APTT 报告形式以秒或APTT比值(APTT测定值/定标血浆APTT值)。
结 果
一、 由不同水平FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ、∶C、FⅩ Ⅱ∶C血浆APTT比值,得到不同试剂对凝血因子缺乏血浆的敏感度曲线。通过比较可以看到不同试剂在凝血因子不同水平时其敏感性有所波动表1。
表1
6种APTT试剂的敏感性比较(APTT测定比值)
因子 Ⅷ Ⅸ Ⅺ Ⅹ Ⅱ Ⅷ Ⅸ Ⅺ Ⅹ Ⅱ Ⅷ Ⅸ Ⅺ Ⅹ Ⅱ
活性 50% 25% 0%
试剂 a 1.21 1.15 1.25 1.14 1.43 1.35 1.49 1.25 3.61 3.64 3.69 1.51
试剂 b 1.28 1.16 1.29 1.13 1.52 1.40 1.56 1.26 3.69 4.24 3.59 1.49
试剂 c 1.12 1.14 1.21 1.01 1.45 1.33 1.44 1.18 3.08 4.00 3.71 1.37
试剂 d 1.23 1.19 1.23 1.20 1.44 1.45 1.55 1.40 3.07 3.40 3.80 1.93
试剂 e 1.49 1.42 1.61 1.17 1.82 1.71 2.06 1.25 3.71 4.08 4.58 1.42
试剂 f 1.37 1.38 1.43 1.03 1.70 1.71 1.84 1.12 3.73 4.32 5.23 1.47
二、 通过对不同肝素浓度试剂的敏感性比较,试剂f过于敏感,在肝素浓度达0.4 IU/ml 时血浆的APTT超过240 s ,试剂 c、d 在肝素浓度>0.75 IU/ml 时仍能检出APTT。其余3种试剂 (a, b, e) 在肝素浓度达0.5 IU/ml 时能反映其血浆APTT检测值。
二、讨 论
各种试剂虽对同一批标本APTT测定值之间的差异有高度显著性,但用APTT比值进行处理后,结果大部分差异都无显著性(P>0.05)。由此可见,以APTT比值的报告形式可以减少因试剂组成不同造成的结果差异,提高结果的可比性。由于试剂的组成不同,参考值范围因此有较大差异。我们以试剂c的均值(接近6种试剂的均值)及s计算正常人组的参考值范围。当取±2s,发现6种试剂的96%的结果包含在内;若取±3s则几乎函盖了所有的数据(99%),此与统计学理论相符。因此,我们认为参考值若以APTT比值形式报告,可以减少因试剂不同所造成的差异,并可用单一值覆盖全部数据。不同的APTT试剂对凝血因子缺乏的检测敏感性是不同的。若以1.36(复盖95%正常人测定值)为正常人APTT比值上限,则试剂 e 及试剂 f 在FⅧ:C、FⅨ:C及FⅪ:C在50%时就表现出比值的异常,而其他试剂则在FⅧ:C、FⅨ:C及FⅪ:C活性在25%时表现出异常。因此,我们认为上述6种APTT试剂均可以检测出血友病,但试剂 e 及试剂f的敏感性要优于其他试剂。目前认为,临床抗凝治疗肝素的浓度在0.2~0.5 IU/ml 较为安全有效[1]。比较6种试剂对肝素的敏感性,发现试剂f对肝素特别敏感,在肝素达0.4 IU/ml 时血浆APTT不凝固,其余5种试剂在0.2~0.5 IU/ml 时,均表现出较好的剂量效应关系,APTT比值也在 1.5~2.5 内,与文献报道相符[2]。试剂 c 及试剂 d 的监测可达 1 IU/ml 肝素。APTT测定中质控血浆的标准化非常重要。若能有权威部门提供标准化的质控品,所有试剂的APTT测定值与之比较得出APTT比率,这样可以增加不同试剂测定结果的可比较性。市售的APTT试剂盒一般由Ca2+离子、激活剂及磷脂组成。各试剂盒3种成份的含量的差异是造成检测结果不可比的主要原因。我们认为,两种浓度的 CaCl2(0.020 mol及0.025 mol)均可使用,但浓度一旦确定,便不应更改。作为激活剂,白陶土、硅土及鞣花酸对凝血因子的激活程度是不同的。目前,白陶土已较少应用,硅土的标准化问题尚未解决,固定浓度的鞣花酸作为单一成份的化学制剂,可能有利于标准化的实施[3]。磷脂在凝血的进程中提供了因子的催化表面,加速活化的因子Ⅹ(FXa)、FⅡa形成。我们所用的6种试剂有来自兔脑或牛脑的磷脂,也有大豆磷脂的提取物,其内容物具有不均一性。新近 Beckman-Coulter 公司采用化学方法合成的磷脂,作为单一成份对检测标准化是有益的。
参考文献:
[1]第七届全国血栓与止血学术会议制定的几项诊断参考标准[J].中华血液学杂志,2000,21:165-168.
[2]Hirai N, Tatsumi N, Hino N, et al. Problems with assays based on fibrin clot formation principle: analysis of multilaboratory data [J]. Osaka city Med J, 1998,44:55-71.
[3]Kagawa K, Fukutake K. Suggestions and propositions to resolve some issues for standardization of prothrombin time and activated partial thromboplastin time [J]. Rinsho Byori, 1999,47:431-437.
关键词: 活化部分凝血活酶时间; 标准化
中图分类号: R446.11 文献标识码: A
文章编号:1001-2087(2000)05-0291-02
活化部分凝血活酶时间 (activated partial thromboplastin time, APTT) 是内源凝血系统最常用的筛选试验。有关APTT检测标准化的报道很少,我对该问题进行了探讨。
材料和方法
一、 材料
1.仪器 ACL 3000 plus 全自动血液凝固仪 (Beckman-Coulter 公司)。
2.主要试剂 (1) APTT试剂:分别为 a.Automated APTT, Organon 产品;b.Silimat, Biomerieux 产品;c.Kontact, Pacific 产品;d.APTT Lyophilized silica, Beckman-Coulter产品; e.Actin, f.Actin-Fs, 均为 Behring 产品。(2) 缺乏因子 Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅹ Ⅱ血浆:均由 Dade Behring提供。(3) 定标血浆:由 Beckman Coulter 公司提供。(4) 肝素标准液:上海生化制药厂提供。(5) 肝素检测试剂:Stago 公司提供。
3.标本 正常人组:53例,年龄18~55岁,男26例,女27例,均为健康献血员。
二、 方法
1.配制不同FⅧ:C活性水平的血浆 用定标血浆1 ml(FⅧ:C为100%)对倍稀释乏FⅧ:C血浆,制成FⅧ:C活性为100%~1.56%的检测血浆。
FⅨ、FⅪ、FⅩ Ⅱ检测血浆的同样配制。
2.配制含不同浓度肝素的血浆 将肝素标准品按比例加入定标血浆中,制成肝素浓度为1~0.0156(IU/ml)的待检血浆。
3.ACL 3000 plus 全自动血凝仪分别检测各组的APTT 报告形式以秒或APTT比值(APTT测定值/定标血浆APTT值)。
结 果
一、 由不同水平FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ、∶C、FⅩ Ⅱ∶C血浆APTT比值,得到不同试剂对凝血因子缺乏血浆的敏感度曲线。通过比较可以看到不同试剂在凝血因子不同水平时其敏感性有所波动表1。
表1
6种APTT试剂的敏感性比较(APTT测定比值)
因子 Ⅷ Ⅸ Ⅺ Ⅹ Ⅱ Ⅷ Ⅸ Ⅺ Ⅹ Ⅱ Ⅷ Ⅸ Ⅺ Ⅹ Ⅱ
活性 50% 25% 0%
试剂 a 1.21 1.15 1.25 1.14 1.43 1.35 1.49 1.25 3.61 3.64 3.69 1.51
试剂 b 1.28 1.16 1.29 1.13 1.52 1.40 1.56 1.26 3.69 4.24 3.59 1.49
试剂 c 1.12 1.14 1.21 1.01 1.45 1.33 1.44 1.18 3.08 4.00 3.71 1.37
试剂 d 1.23 1.19 1.23 1.20 1.44 1.45 1.55 1.40 3.07 3.40 3.80 1.93
试剂 e 1.49 1.42 1.61 1.17 1.82 1.71 2.06 1.25 3.71 4.08 4.58 1.42
试剂 f 1.37 1.38 1.43 1.03 1.70 1.71 1.84 1.12 3.73 4.32 5.23 1.47
二、 通过对不同肝素浓度试剂的敏感性比较,试剂f过于敏感,在肝素浓度达0.4 IU/ml 时血浆的APTT超过240 s ,试剂 c、d 在肝素浓度>0.75 IU/ml 时仍能检出APTT。其余3种试剂 (a, b, e) 在肝素浓度达0.5 IU/ml 时能反映其血浆APTT检测值。
二、讨 论
各种试剂虽对同一批标本APTT测定值之间的差异有高度显著性,但用APTT比值进行处理后,结果大部分差异都无显著性(P>0.05)。由此可见,以APTT比值的报告形式可以减少因试剂组成不同造成的结果差异,提高结果的可比性。由于试剂的组成不同,参考值范围因此有较大差异。我们以试剂c的均值(接近6种试剂的均值)及s计算正常人组的参考值范围。当取±2s,发现6种试剂的96%的结果包含在内;若取±3s则几乎函盖了所有的数据(99%),此与统计学理论相符。因此,我们认为参考值若以APTT比值形式报告,可以减少因试剂不同所造成的差异,并可用单一值覆盖全部数据。不同的APTT试剂对凝血因子缺乏的检测敏感性是不同的。若以1.36(复盖95%正常人测定值)为正常人APTT比值上限,则试剂 e 及试剂 f 在FⅧ:C、FⅨ:C及FⅪ:C在50%时就表现出比值的异常,而其他试剂则在FⅧ:C、FⅨ:C及FⅪ:C活性在25%时表现出异常。因此,我们认为上述6种APTT试剂均可以检测出血友病,但试剂 e 及试剂f的敏感性要优于其他试剂。目前认为,临床抗凝治疗肝素的浓度在0.2~0.5 IU/ml 较为安全有效[1]。比较6种试剂对肝素的敏感性,发现试剂f对肝素特别敏感,在肝素达0.4 IU/ml 时血浆APTT不凝固,其余5种试剂在0.2~0.5 IU/ml 时,均表现出较好的剂量效应关系,APTT比值也在 1.5~2.5 内,与文献报道相符[2]。试剂 c 及试剂 d 的监测可达 1 IU/ml 肝素。APTT测定中质控血浆的标准化非常重要。若能有权威部门提供标准化的质控品,所有试剂的APTT测定值与之比较得出APTT比率,这样可以增加不同试剂测定结果的可比较性。市售的APTT试剂盒一般由Ca2+离子、激活剂及磷脂组成。各试剂盒3种成份的含量的差异是造成检测结果不可比的主要原因。我们认为,两种浓度的 CaCl2(0.020 mol及0.025 mol)均可使用,但浓度一旦确定,便不应更改。作为激活剂,白陶土、硅土及鞣花酸对凝血因子的激活程度是不同的。目前,白陶土已较少应用,硅土的标准化问题尚未解决,固定浓度的鞣花酸作为单一成份的化学制剂,可能有利于标准化的实施[3]。磷脂在凝血的进程中提供了因子的催化表面,加速活化的因子Ⅹ(FXa)、FⅡa形成。我们所用的6种试剂有来自兔脑或牛脑的磷脂,也有大豆磷脂的提取物,其内容物具有不均一性。新近 Beckman-Coulter 公司采用化学方法合成的磷脂,作为单一成份对检测标准化是有益的。
参考文献:
[1]第七届全国血栓与止血学术会议制定的几项诊断参考标准[J].中华血液学杂志,2000,21:165-168.
[2]Hirai N, Tatsumi N, Hino N, et al. Problems with assays based on fibrin clot formation principle: analysis of multilaboratory data [J]. Osaka city Med J, 1998,44:55-71.
[3]Kagawa K, Fukutake K. Suggestions and propositions to resolve some issues for standardization of prothrombin time and activated partial thromboplastin time [J]. Rinsho Byori, 1999,47:431-437.