目的研制乌梢蛇DNA提取和检测试剂,对试剂盒的特异性、稳定性和重复性进行评价,并对市售乌梢蛇药材进行质量检测,最终开发乌梢蛇DNA检测试剂盒。方法应用现代的DNA指纹技术,对2015年版《中国药典》乌梢蛇DNA检测方法进行了优化和改良,研制了乌梢蛇DNA提取和检测试剂,开发了乌梢蛇PCR检测试剂盒,并对试剂盒检测参数进行评价。应用该试剂盒对随机抽取北京、天津、长春和吉林4个城市的18个乌梢蛇样品,进行检测,同时与药典DNA方法进行比对试验。结果乌梢蛇DNA检测试剂盒经反复冻融5、10和20次后依然有效。18个市售乌梢蛇样品中14个样品为正品,4个样品为伪品。多次试验特异性、稳定性和重复性结果完全相同。试剂盒法与药典法检测结果一致。且试剂盒法可在普通实验室内完成DNA检测任务。结论乌梢蛇DNA检测试剂盒对乌梢蛇药材鉴别简单方便、准确有效。适用于乌梢蛇DNA的快速检测。