氟对体外培养人软骨细胞的影响

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目的 探讨氟对体外培养人软骨细胞细胞活力和超微结构的影响.方法 采用细胞培养的方法,体外原代培养24~27周龄自然流产死亡胎儿的关节软骨细胞,取第3代细胞进行实验,按染氟剂量不同分为0(对照)、10-2、5×10-3、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L组.采用细胞增殖与毒性检测方法(细胞计数试剂盒-8,CCK-8),在染氟24、48、72 h测定细胞活力变化;通过透射电镜观察氟对细胞超微结构的影响.结果 人软骨细胞染氟(10-2、5×10-3、10-3、104、10-5、10-6、10-7、104 mol/L)24 h后其细胞活力分别为(15.04±0.55)%、(62.53±1.03)%、(100.34±5.19)%、(111.40±3.69)%、(121.47±6.09)%、(i29.95±4.96)%、(121.81±4.97)%、(111.00±1.63)%;48 h后分别为(10.35±0.64)%、(35.23±2.41)%、(110.30±2.07)%、(113.66±6.98)%、(120.36±6.23)%、(133.40±5.80)%、(126.06±5.40)%、(115.62±7.33)%;72 h后分别为(6.19±0.16)%、(18.44±0.21)%、(120.83±4.93)%、(123.77±4.82)%、(129.09±5.21)%、(140.44±4.18)%、(131.99±7.00)%、(124.10±3.68)%.在24、48、72 h,10-2、5×10-3 mol/L染氟组细胞活力均低于对照组[(100.00±0.00)%、(100.00±0.00)%、(100.00±0.00)%,P均<0.05].10-2与5×10-3 mol/L组比较,其细胞活力均减小(P均< 0.05);氟在10-2和5×10-3 mol/L时,抑制人软骨细胞活力,促进细胞的凋亡,且其细胞活力随着染氟剂量的增加和作用时间的延长而逐渐减小.在24、48、72 h,10-3~ 10-8 mol/L染氟组细胞活力(24 h10-3 mol/L组虽高于对照组,但差异无统计学意义)均高于对照组[(100.00±0.00)%、(100.00±0.00)%、(100.00±0.00)%,P均<0.05].10-4组与10-3 mol/L组比较(48 h、72 h,细胞活力增加,但差异无统计学意义),10-5与10-4 mol/L组比较(72 h,细胞活力增加,但差异无统计学意义),10-6与10-5 mol/L组比较,其细胞活力增加,且差异有统计学意义(P均< 0.05);10-7和10-6 mol/L组比较,10-8与10-7 mol/L组比较(72 h,细胞活力减小,但差异无统计学意义),其细胞活力减小,且差异有统计学意义(P均< 0.05).10-3 ~ 10-8 moL/L浓度的氟促进人软骨细胞的增殖,且随着染氟时间的延长其细胞活力逐渐增加;10-6 mol/L为促进软骨细胞增殖的最佳浓度.电镜下,可见对照组软骨细胞形态规则,表面具有微柔毛结构,细胞内胞浆丰富,内有大量的线粒体,粗面内质网发达,稍微扩张,内含低电子致密物质;10-6 mol/L染氟组,可见细胞内线粒体增多,部分线粒体肿胀,粗面内质网肥大扩张;5×10-3 mol/L染氟组,可见细胞表面微绒毛减少,胞膜内陷,染色质固缩、边集,出现凋亡细胞.结论 氟在10-3 ~ 10-8 mol/L时,可以促进体外培养人软骨细胞的增殖,剂量升高时(10-2、5×10-3mol/L),则促进细胞的凋亡。

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