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摘 要 目的：提高西帕依麦孜彼子口服液的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对制剂中栀子、芡实、绵萆薢、金樱子和桑椹药材进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定制剂中栀子苷的含量，色谱柱为Waters Cosmosil C18，流动相为甲醇-水（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为240 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。 结果：栀子、芡实、绵萆薢、金樱子和桑椹药材的TLC图斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰。栀子苷检测质量浓度线性范围为9.9～198.0 μg/mL（r=0.999 9）；定量限为9.9 μg/mL；加样回收率为97.30%～101.09%（RSD=1.35%，n=6）；中间精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%；耐用性试验的RSD均小于2%。结论：该研究所建标准可用于西帕依麦孜彼子口服液的质量控制。
关键词 西帕依麦孜彼子口服液； 薄层色谱法；高效液相色谱法；含量测定；栀子苷
中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）16-2238-05
ABSTRACT OBJECTIVE： To improve the quality standard of Xipayi mzibizi oral liquid. METHODS： TLC was used to identify Gardenia jasminoides，Euryale ferox， Dioscoreae Spongiosae Rhizoma， Rosa laevigata， Morus alba， qualitatively. The content of geniposide in the preparation was determined by HPLC. The determination was performed on Waters Cosmosil C18 column with mobile phase consisted of methanol-water （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 240 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： TLC spots of G. jasminoides，E. ferox， Dioscoreae Spongiosae Rhizoma，R. laevigata， M. alba were clear and well-separated without interference from negative control. The linear range of geniposide were 9.9～198.0 μg/mL （r=0.999 9）. The limit of quantitation was 9.9 μg/mL； the recoveries were 97.30%-101.09% （RSD=1.35%， n=6）. RSDs of inter-precision， stability and reproducibility tests were all lower than 2%. RSDs of durability tests were lower than 2%. CONCLUSIONS： Established standard can be used for quality control of Xipayi mzibizi oral liquid.
KEYWORDS Xipayi mzibizi oral liquid； TLC； HPLC； Content determination； Geniposide
民族藥制剂现阶段质量标准水平较低，有待提高和完善。国家药典委员会将维吾尔药制剂西帕依麦孜彼子口服液列为2015年度国家药品标准提高项目（中药）品种。该制剂由栀子、芡实、绵萆薢、金樱子和桑椹等5味药材组合而成，具有增强机体营养力、排泄力和清浊利尿的功效，临床多用于前列腺炎与前列腺增生所致诸证的治疗。该制剂现有标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》（1999年版）[1]，此标准只列入了成品性状、桑椹的薄层色谱（TLC）鉴别及合剂项下规定的检查项，无制剂中其他药材的鉴别及含量测定，标准欠全面。为此，本课题组对该制剂进行全面深入研究，首先建立了栀子[2-3]、芡实[4]、绵萆薢[5]、金樱子[6]、桑椹[7-8]的TLC鉴别方法，后以栀子有效成分栀子苷作为含量测定指标，建立了专属性较强的高效液相色谱法（HPLC），旨在为完善和提高该制剂的质量标准提供参考。
1 材料
1.1 仪器
U3000型HPLC仪，包括二极管阵列检测器（美国Thermo Fisher Scientific公司）；BP211D型十万分之一电子分析天平（德国Sartorius公司）；SK3300HP型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；DT-500A型百分之一电子计数天平（常熟市金羊砝码仪器有限公司金羊天平仪器厂）；DZTW型调温电热套、XMTD-4000型电热恒温水浴锅、202-O型台式干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）；RE-201D型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；WFH-201B型紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司）；SP-20E型全自动点样仪（上海科哲生化科技有限公司）。
1.2 药品与试剂
西帕依麦孜彼子口服液（新疆奇康哈博维药股份有限公司，批号：160334、160351、160439、160440、160441、160442、160443、160529、160530、160628，规格：10 mL/支）；栀子苷对照品（批号：110749-201316，纯度：97.5%）、栀子对照药材（批号：120986-201309）、芡实对照药材（批号：121421-201303）、绵萆薢对照药材（批号：121545- 200501）、金樱子对照药材（批号：121047- 201204）、桑椹对照药材（批号：121158-201103）均购于中国食品药品检定研究院；硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。 1.3 药材
栀子（批号：151228-1）、芡实（批号：160229-2）、绵萆薢（批号：160229-3）、金樱子（批号：160229-4）和桑椹（批号：140626-1）药材均购于新疆奇康哈博维药股份有限公司，经新疆维吾尔自治区药物研究所民族药室何江副研究员鉴定为真品。
2 方法与结果
2.1 TLC鉴别
2.1.1 栀子 取样品20 mL，蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解，制成供试品溶液。取栀子对照药材细粉（过2号筛）0.2 g，加水20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解，制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺栀子的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（10 ∶ 10 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图1。
2.1.2 芡实 取样品50 mL，用二氯甲烷振摇提取2次，每次50 mL，合并2次提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，制成供试品溶液。取芡实对照药材细粉（过2号筛）0.5 g，加二氯甲烷30 mL，超声（功率：160 W，频率：59 kHz，下同）处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺芡实的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图2。
2.1.3 绵萆薢 取样品40 mL，加甲醇100 mL，加热回流1 h，滤过，滤液加盐酸5 mL，加热回流2 h，放冷，用石油醚振摇提取3 次，每次100 mL，合并3次提取液，蒸干，残渣加甲醇l mL使溶解，制成供试品溶液。取绵萆薢对照药材细粉（过2号筛）0.1 g，加甲醇50 mL，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺绵萆薢的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图3。
2.1.4 金樱子 取样品20 mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并2次提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制成供试品溶液。取金樱子对照药材细粉（过2号筛）1 g，加乙醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺金樱子的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）為展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图4。
2.1.5 桑椹 取样品20 mL，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10 mL，合并2次提取液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制成供试品溶液。取栀子苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为2 mg/mL的对照品溶液。取桑椹对照药材细粉（过2号筛）5 g，加60%乙醇溶液30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至10 mL，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺桑椹的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述4种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（15 ∶ 2 ∶ 4，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视；或喷以5%磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图5。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Cosmosil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（0～5 min，5% A→10% A；5.01～13 min，20% A→56%A；13.01～18 min，80% A；18.01～23 min，5%A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL[10-12]。
2.2.2 对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶液制成质量浓度为100 μg/mL的对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取样品1 mL，置于10 mL量瓶中，加50%甲醇溶液定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.4 阴性对照溶液的制备 按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺栀子的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.2.5 专属性试验 取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图6。结果，阴性对照在与栀子苷对照品保留时间相应处无色谱峰干扰，表明本方法专属性良好。
2.2.6 线性关系考察 精密称取栀子苷对照品适量，加50%甲醇溶液制成质量浓度为0.99 mg/mL的对照品贮备液，再加50%甲醇溶液稀释制成栀子苷质量浓度分别为9.9、49.5、99.0、148.5、198.0 μg/mL的系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以栀子苷质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程y=0.180 4x+0.047 1（r=0.999 9）。结果表明，栀子苷检测质量浓度线性范围为9.9～198.0 μg/mL。
2.2.7 定量限考察 分别精密量取“2.2.2”项下对照品溶液适量，倍比稀释，并按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1计算定量限，得栀子苷定量限为9.9 μg/mL。
2.2.8 中间精密度试验 由2名分析员分别在不同日期精密称取样品（批号：160351）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各6份，再按“2.2.1”项下色谱条件在不同仪器上进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷峰面积的RSD为1.23%（n=6），表明本方法中间精密度良好。
2.2.9 稳定性试验 取“2.2.3”项下供试品溶液（批号：160351）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、12、24、48 h时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷峰面积的RSD为0.27%（n=8），表明供试品溶液在室温下放置48 h内基本稳定。
2.2.10 重复性试验 精密称取样品（批号：160351）适量，共6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，栀子苷含量平均值为1.085 mg/mL，RSD为0.60%（n=6），表明本方法重复性良好。
2.2.11 加样回收率试验 取已知含量样品（批号：160351）适量，共6份，分别加入一定质量浓度的栀子苷对照品溶液适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。
2.2.12 耐用性试验 （1）色谱柱考察：精密称取样品（批号：160442）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件[分别设置色谱柱为YMC-Pack ODS-A C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Cosmosil Waters C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）]进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。结果表明，色谱柱发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。（2）流速考察：精密称取样品（批号：160442）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件（分别设置流速为0.9、1.0、1.1 mL/min）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。结果表明，流速发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。（3）柱温考察：精密称取样品（批号：160442）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件（分别设置柱温为25、30、35 ℃）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。结果表明，柱温发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。
2.2.13 样品含量测定 取10批样品各适量，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，平行测定3次，记录峰面积并计算样品含量，结果见表3。
3 讨论
民族医药是我国各少数民族在长期生产和与疾病作斗争的医疗实践中逐步摸索总结出来的，具有较好的临床应用基础，是我国传统医药的重要组成部分，但其整体质量标准水平较低，仍然多集中于药材基源及鉴定的研究，并未充分利用现代分离分析技术和方法对其物质基础进行深入探讨，大多数尚未建立多组分、多指标的质量控制体系，严重制约了民族医药的发展。本课题组在对维吾尔药制剂西帕依麦孜彼子口服液深入研究的基础上，提高并拟订了新的质量标准，希望有助于推动维吾尔药质量标准的提高。
在芡实的TLC鉴别研究中，笔者曾用乙酸乙酯-冰醋酸-水（15 ∶ 2 ∶ 4，V/V/V）为展开剂，同时筛选了不同的显色剂（10%硫酸乙醇溶液、三氯化铝试液、5%香草醛硫酸溶液）[5]，但均出现了无明显斑点、拖尾等现象。而以正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，斑点清晰、圆整，阴性对照无干扰，故以此作为芡实TLC鉴别方法。
在绵萆薢的TLC鉴别研究中，笔者曾用三氯甲烷-丙酮（9 ∶ 1，V/V）为展开剂[12]，喷以10%磷钼酸乙醇溶液显色，结果斑点拖尾严重，阴性对照有干扰。又尝试用正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，喷以10%磷钼酸乙醇溶液显色，结果斑点仍不清晰，阴性对照仍有干扰，后改用5%香草醛硫酸溶液为显色剂，结果斑点清晰，阴性对照无干扰，故以此作为绵萆薢TLC鉴别方法。
在金樱子的TLC鉴别研究中，笔者曾用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6 ∶ 4 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）為展开剂[13-14]，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，结果斑点不清晰；进而尝试用乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V/V）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，结果展开剂极性过大，无明显斑点。而以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）为展开剂，5%磷钼酸乙醇溶液为显色剂，斑点数较多、清晰，阴性对照无干扰，故以此作为金樱子TLC鉴别方法。 维吾尔药制剂的组成复杂，且采用不同的工艺会使得制剂的成分也有所不同。笔者参照文献[15-16]前期分别选择芦丁、栀子苷、白藜芦醇和薯蓣皂苷进行了测定，发现栀子苷为该制剂的主要成分，其他成分含量均较低，不适合作为含量测定指标性成分。故選择栀子苷作为该制剂的含量测定指标性成分。
在栀子苷对照品的溶剂考察中，笔者分别筛选了乙醇、甲醇、50%甲醇溶液，结果发现，栀子苷在甲醇和乙醇中虽然溶解较好，但出现峰分叉，这一现象可能是由于溶剂效应造成的；而桅子苷在50%甲醇溶液中不仅易溶，且峰形尖锐对称，故最终选样50%甲醇溶液作为对照品溶液制备所用溶剂。
综上所述，本研究所建标准可用于西帕依麦孜彼子口服液的质量控制。
参考文献
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（收稿日期：2017-10-13 修回日期：2018-04-23）
（编辑：张 静）
关键词 西帕依麦孜彼子口服液； 薄层色谱法；高效液相色谱法；含量测定；栀子苷
中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）16-2238-05
ABSTRACT OBJECTIVE： To improve the quality standard of Xipayi mzibizi oral liquid. METHODS： TLC was used to identify Gardenia jasminoides，Euryale ferox， Dioscoreae Spongiosae Rhizoma， Rosa laevigata， Morus alba， qualitatively. The content of geniposide in the preparation was determined by HPLC. The determination was performed on Waters Cosmosil C18 column with mobile phase consisted of methanol-water （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 240 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： TLC spots of G. jasminoides，E. ferox， Dioscoreae Spongiosae Rhizoma，R. laevigata， M. alba were clear and well-separated without interference from negative control. The linear range of geniposide were 9.9～198.0 μg/mL （r=0.999 9）. The limit of quantitation was 9.9 μg/mL； the recoveries were 97.30%-101.09% （RSD=1.35%， n=6）. RSDs of inter-precision， stability and reproducibility tests were all lower than 2%. RSDs of durability tests were lower than 2%. CONCLUSIONS： Established standard can be used for quality control of Xipayi mzibizi oral liquid.
KEYWORDS Xipayi mzibizi oral liquid； TLC； HPLC； Content determination； Geniposide
民族藥制剂现阶段质量标准水平较低，有待提高和完善。国家药典委员会将维吾尔药制剂西帕依麦孜彼子口服液列为2015年度国家药品标准提高项目（中药）品种。该制剂由栀子、芡实、绵萆薢、金樱子和桑椹等5味药材组合而成，具有增强机体营养力、排泄力和清浊利尿的功效，临床多用于前列腺炎与前列腺增生所致诸证的治疗。该制剂现有标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》（1999年版）[1]，此标准只列入了成品性状、桑椹的薄层色谱（TLC）鉴别及合剂项下规定的检查项，无制剂中其他药材的鉴别及含量测定，标准欠全面。为此，本课题组对该制剂进行全面深入研究，首先建立了栀子[2-3]、芡实[4]、绵萆薢[5]、金樱子[6]、桑椹[7-8]的TLC鉴别方法，后以栀子有效成分栀子苷作为含量测定指标，建立了专属性较强的高效液相色谱法（HPLC），旨在为完善和提高该制剂的质量标准提供参考。
1 材料
1.1 仪器
U3000型HPLC仪，包括二极管阵列检测器（美国Thermo Fisher Scientific公司）；BP211D型十万分之一电子分析天平（德国Sartorius公司）；SK3300HP型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；DT-500A型百分之一电子计数天平（常熟市金羊砝码仪器有限公司金羊天平仪器厂）；DZTW型调温电热套、XMTD-4000型电热恒温水浴锅、202-O型台式干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）；RE-201D型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；WFH-201B型紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司）；SP-20E型全自动点样仪（上海科哲生化科技有限公司）。
1.2 药品与试剂
西帕依麦孜彼子口服液（新疆奇康哈博维药股份有限公司，批号：160334、160351、160439、160440、160441、160442、160443、160529、160530、160628，规格：10 mL/支）；栀子苷对照品（批号：110749-201316，纯度：97.5%）、栀子对照药材（批号：120986-201309）、芡实对照药材（批号：121421-201303）、绵萆薢对照药材（批号：121545- 200501）、金樱子对照药材（批号：121047- 201204）、桑椹对照药材（批号：121158-201103）均购于中国食品药品检定研究院；硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。 1.3 药材
栀子（批号：151228-1）、芡实（批号：160229-2）、绵萆薢（批号：160229-3）、金樱子（批号：160229-4）和桑椹（批号：140626-1）药材均购于新疆奇康哈博维药股份有限公司，经新疆维吾尔自治区药物研究所民族药室何江副研究员鉴定为真品。
2 方法与结果
2.1 TLC鉴别
2.1.1 栀子 取样品20 mL，蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解，制成供试品溶液。取栀子对照药材细粉（过2号筛）0.2 g，加水20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1 mL使溶解，制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺栀子的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（10 ∶ 10 ∶ 2 ∶ 1，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图1。
2.1.2 芡实 取样品50 mL，用二氯甲烷振摇提取2次，每次50 mL，合并2次提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，制成供试品溶液。取芡实对照药材细粉（过2号筛）0.5 g，加二氯甲烷30 mL，超声（功率：160 W，频率：59 kHz，下同）处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺芡实的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图2。
2.1.3 绵萆薢 取样品40 mL，加甲醇100 mL，加热回流1 h，滤过，滤液加盐酸5 mL，加热回流2 h，放冷，用石油醚振摇提取3 次，每次100 mL，合并3次提取液，蒸干，残渣加甲醇l mL使溶解，制成供试品溶液。取绵萆薢对照药材细粉（过2号筛）0.1 g，加甲醇50 mL，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺绵萆薢的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图3。
2.1.4 金樱子 取样品20 mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并2次提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制成供试品溶液。取金樱子对照药材细粉（过2号筛）1 g，加乙醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺金樱子的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述3种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）為展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图4。
2.1.5 桑椹 取样品20 mL，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10 mL，合并2次提取液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制成供试品溶液。取栀子苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为2 mg/mL的对照品溶液。取桑椹对照药材细粉（过2号筛）5 g，加60%乙醇溶液30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至10 mL，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺桑椹的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。按 2015年版《中国药典》（四部）TLC法[9]试验，吸取上述4种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（15 ∶ 2 ∶ 4，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视；或喷以5%磷钼酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图5。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Cosmosil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱（0～5 min，5% A→10% A；5.01～13 min，20% A→56%A；13.01～18 min，80% A；18.01～23 min，5%A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL[10-12]。
2.2.2 对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶液制成质量浓度为100 μg/mL的对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取样品1 mL，置于10 mL量瓶中，加50%甲醇溶液定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.4 阴性对照溶液的制备 按西帕依麦孜彼子口服液处方和工艺制备缺栀子的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.2.5 专属性试验 取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图6。结果，阴性对照在与栀子苷对照品保留时间相应处无色谱峰干扰，表明本方法专属性良好。
2.2.6 线性关系考察 精密称取栀子苷对照品适量，加50%甲醇溶液制成质量浓度为0.99 mg/mL的对照品贮备液，再加50%甲醇溶液稀释制成栀子苷质量浓度分别为9.9、49.5、99.0、148.5、198.0 μg/mL的系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以栀子苷质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程y=0.180 4x+0.047 1（r=0.999 9）。结果表明，栀子苷检测质量浓度线性范围为9.9～198.0 μg/mL。
2.2.7 定量限考察 分别精密量取“2.2.2”项下对照品溶液适量，倍比稀释，并按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1计算定量限，得栀子苷定量限为9.9 μg/mL。
2.2.8 中间精密度试验 由2名分析员分别在不同日期精密称取样品（批号：160351）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各6份，再按“2.2.1”项下色谱条件在不同仪器上进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷峰面积的RSD为1.23%（n=6），表明本方法中间精密度良好。
2.2.9 稳定性试验 取“2.2.3”项下供试品溶液（批号：160351）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、12、24、48 h时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷峰面积的RSD为0.27%（n=8），表明供试品溶液在室温下放置48 h内基本稳定。
2.2.10 重复性试验 精密称取样品（批号：160351）适量，共6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，栀子苷含量平均值为1.085 mg/mL，RSD为0.60%（n=6），表明本方法重复性良好。
2.2.11 加样回收率试验 取已知含量样品（批号：160351）适量，共6份，分别加入一定质量浓度的栀子苷对照品溶液适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。
2.2.12 耐用性试验 （1）色谱柱考察：精密称取样品（批号：160442）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件[分别设置色谱柱为YMC-Pack ODS-A C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Cosmosil Waters C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Phenomenex Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）]进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。结果表明，色谱柱发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。（2）流速考察：精密称取样品（批号：160442）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件（分别设置流速为0.9、1.0、1.1 mL/min）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。结果表明，流速发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。（3）柱温考察：精密称取样品（批号：160442）适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件（分别设置柱温为25、30、35 ℃）进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。结果表明，柱温发生一定程度变化时，本方法能满足试验要求，耐用性良好。
2.2.13 样品含量测定 取10批样品各适量，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，平行测定3次，记录峰面积并计算样品含量，结果见表3。
3 讨论
民族医药是我国各少数民族在长期生产和与疾病作斗争的医疗实践中逐步摸索总结出来的，具有较好的临床应用基础，是我国传统医药的重要组成部分，但其整体质量标准水平较低，仍然多集中于药材基源及鉴定的研究，并未充分利用现代分离分析技术和方法对其物质基础进行深入探讨，大多数尚未建立多组分、多指标的质量控制体系，严重制约了民族医药的发展。本课题组在对维吾尔药制剂西帕依麦孜彼子口服液深入研究的基础上，提高并拟订了新的质量标准，希望有助于推动维吾尔药质量标准的提高。
在芡实的TLC鉴别研究中，笔者曾用乙酸乙酯-冰醋酸-水（15 ∶ 2 ∶ 4，V/V/V）为展开剂，同时筛选了不同的显色剂（10%硫酸乙醇溶液、三氯化铝试液、5%香草醛硫酸溶液）[5]，但均出现了无明显斑点、拖尾等现象。而以正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，斑点清晰、圆整，阴性对照无干扰，故以此作为芡实TLC鉴别方法。
在绵萆薢的TLC鉴别研究中，笔者曾用三氯甲烷-丙酮（9 ∶ 1，V/V）为展开剂[12]，喷以10%磷钼酸乙醇溶液显色，结果斑点拖尾严重，阴性对照有干扰。又尝试用正己烷-丙酮（4 ∶ 1，V/V）为展开剂，喷以10%磷钼酸乙醇溶液显色，结果斑点仍不清晰，阴性对照仍有干扰，后改用5%香草醛硫酸溶液为显色剂，结果斑点清晰，阴性对照无干扰，故以此作为绵萆薢TLC鉴别方法。
在金樱子的TLC鉴别研究中，笔者曾用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6 ∶ 4 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）為展开剂[13-14]，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，结果斑点不清晰；进而尝试用乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V/V）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，结果展开剂极性过大，无明显斑点。而以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（5 ∶ 5 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）为展开剂，5%磷钼酸乙醇溶液为显色剂，斑点数较多、清晰，阴性对照无干扰，故以此作为金樱子TLC鉴别方法。 维吾尔药制剂的组成复杂，且采用不同的工艺会使得制剂的成分也有所不同。笔者参照文献[15-16]前期分别选择芦丁、栀子苷、白藜芦醇和薯蓣皂苷进行了测定，发现栀子苷为该制剂的主要成分，其他成分含量均较低，不适合作为含量测定指标性成分。故選择栀子苷作为该制剂的含量测定指标性成分。
在栀子苷对照品的溶剂考察中，笔者分别筛选了乙醇、甲醇、50%甲醇溶液，结果发现，栀子苷在甲醇和乙醇中虽然溶解较好，但出现峰分叉，这一现象可能是由于溶剂效应造成的；而桅子苷在50%甲醇溶液中不仅易溶，且峰形尖锐对称，故最终选样50%甲醇溶液作为对照品溶液制备所用溶剂。
综上所述，本研究所建标准可用于西帕依麦孜彼子口服液的质量控制。
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（收稿日期：2017-10-13 修回日期：2018-04-23）
（编辑：张 静）