【摘 要】
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目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能.方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pM
【机 构】
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南京医科大学细胞生物学与医学遗传学系,浙江大学医学院公共卫生系
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目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能.方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS-ANG-EGFP.该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白.激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况.结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上.Western blo
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