【摘 要】
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目的观察不同生长因子对成人关节软骨细胞(adulthumanarticularchondrocytes,AHAC)增殖的影响,探索AHAC体外大量扩增的方法。方法以酶消化法从成人关节软骨分离细胞,条件培养
【机 构】
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解放军总医院第二附属医院骨科,北京
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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目的观察不同生长因子对成人关节软骨细胞(adulthumanarticularchondrocytes,AHAC)增殖的影响,探索AHAC体外大量扩增的方法。方法以酶消化法从成人关节软骨分离细胞,条件培养基培养;传2代细胞分别用不同浓度成纤维细胞生长因子2(fibroblastgrowthfactor-2,FGF-2)、转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)、血小板衍生因子bb(plateletderivedgrowthfactor-bb,PDGF-bb)、肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)或其不同组合作用。用MTT法比较细胞增殖情况,用组化和免疫组化检测观察细胞表型变化。结果FGF-2、TGF-!1、PDGF-bb、HGF均有促AHAC增殖的作用,其最大效应剂量分别是50ng/ml、1ng/ml、1ng/ml、20ng/ml。5ng/mlFGF-2+1ng/mlTGF-β1有最强的促增殖作用,继续加用PDGF-bb和(或)HGF无进一步促进作用;用这一因子组合培养AHAC,可以传10代以上,细胞扩增2000倍以上,且传9代细胞仍弱表达Ⅱ型胶原和aggre-can。结论FGF-2、TGF-β1、PDGF-bb、HGF均对AHAC有一定的促增殖作用;5ng/mlFGF-2+1ng/mlTGF-β1有最大的促增殖效应,细胞短期内大量扩增,且在大量扩增的同时维持了一定的软骨细胞表型,因此是合适的AHAC体外大量扩增促进剂。
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