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聚合酶链反应(PCR)是分子生物学研究中最广泛使用的技术,但其影响因素较多,常导致基因扩增效率低下。我们分别用试剂盒提取法和基因释放剂(genereleaser)提取法进行模板制备,得到了不同质量的基因模板,PCR的扩增效率也不同,现报告如下: 材料与方法结核分支杆菌H37RV,由中国生物制品检定所提供;结核分支杆菌热休克蛋白(hsp 70)引物由上海生工公司合成;DNA提取试剂盒购自上海华舜公司;基因释放剂为美国Bioventures公司产品,分别按照试剂盒说明进行DNA提取。PCR扩增参数为:50 μl反应体系,94℃预变性3 min;93℃变性1.5 min、60℃退火2 min、72℃延伸4 min,共35个循环,最后再72℃延伸10 min。PCR产物作琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外线下观察分析。 结果研究设计目的基因片段大小应为1 800 bp。采用试剂盒提取DNA制备模板,未见产物;而用基因释放剂的方法制备模板,则在相对分子质量标准1 489 bp和1 882 bp之间靠近后者处,有一清晰扩增带,为目的基因。