【摘 要】
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目的 克隆、表达、纯化E型沙眼衣原体多形外膜蛋白(PmpG),并鉴定其免疫原性.方法 用PCR技术扩增从E型沙眼衣原体中提取的PmpG基因片段,再将其定向插入到原核表达载体PET30a(+
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目的 克隆、表达、纯化E型沙眼衣原体多形外膜蛋白(PmpG),并鉴定其免疫原性.方法 用PCR技术扩增从E型沙眼衣原体中提取的PmpG基因片段,再将其定向插入到原核表达载体PET30a(+)中,构建重组表达质粒,将其转化入E.coli DH5α中,并用酶切分析、PCR扩增及基因序列测定等对重组质粒进行鉴定,诱导表达后用SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,然后进行蛋白纯化,并免疫BALB/c小鼠鉴定其免疫原性.结果 PCR扩增出约1092 bp DNA片段,序列测定证实与基因库的E型沙眼衣原体一致;表达产物的相对分子质量为55 000,与预期分子量相符,Western印迹证实表达产物为特异性蛋白,纯化后的蛋白免疫小鼠获得抗原特异性抗体.结论 构建的PmpG原核表达载体在大肠杆菌中得到了表达,且具有免疫原性.
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