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1993年，Key等开始尝试用两种不同种类的抗体检测同一组织或细胞的两种不同抗原，即双染色法’‘，来检测向一组织或细胞不同部位表达的两种蛋白；利用两种蛋白在同一部位，其混合颜色与单独显示两种抗原颜色不一致，来推断两种蛋白是否共表达于同一部位。但是，由于两种抗原在同一部位，如果用常规免疫组化检测方法显示第一种抗原，其反应产物广泛沉淀，极易覆盖第二抗原的结合位点，从而影响第二抗原的检测反应。这一直是困扰双染色法检测的问题。新近，DAKO公司推出了一种新的染色增强系统，被命名为CSA（catalyzedsign