【摘 要】
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目的:研究rAAV/丙型肝炎病毒核心抗原基因[hepatitis C virus(HCV)core gene]转染树突状细胞(dendritic cell.DC)的可行性.方法:构建重组质粒AAV(d16.95)/Core p5(简称rAAV/C
【机 构】
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南方医科大学南方医院生物治疗研究中心, 广州市,510515南方医科大学南方医院呼吸科, 广州市,510515;72004,美国阿肯色大学医学院;
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目的:研究rAAV/丙型肝炎病毒核心抗原基因[hepatitis C virus(HCV)core gene]转染树突状细胞(dendritic cell.DC)的可行性.方法:构建重组质粒AAV(d16.95)/Core p5(简称rAAV/Core),并以pSH3包装系统制备该病毒.分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),以rAAV/Core病毒转染DC前体细胞(基因转染组),采用巨噬细胞集落刺激因子、白介素-4、肿瘤坏死因子-d诱导成熟.3 d后.收集部分DC,以流式细胞仪检测rAAV/Core转染效率及HCV核心抗原在Dc中的表达情况.7 d后,收集细胞,PCR/Southern blot分析rAAV/Core DNA在DC染色体的整合情况.显微镜下观察DC形态,流式细胞仪检测DC表面分子标志CDla、CD40、CD80、CD83、CD86的表达情况.结果:rAAV/Core成功转染DC,质粒DNA整合到DC染色体上,HCV核心抗原基因在DC内表达,DC成熟不受病毒转染影响,具有典型DC外观并高表达特异的成熟DC表面标志.结论:rAAV/Core转染和制备DC的成功为丙型病毒性肝炎的DC免疫治疗打下实验室基础.
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