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目的
探究利拉鲁肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞与单核细胞黏附的抑制作用及其机制。
方法以高糖(20 mmol/L)诱导的内皮细胞为实验对象,加入不同浓度利拉鲁肽(0、0.3、3、30 nmol/L)预孵育不同时间,将荧光染料标记的单核细胞与内皮细胞共育1 h,随后用M199培养基洗去未黏附的细胞,并用荧光酶标仪检测内皮细胞和单核细胞的黏附状况;用qRT-PCR和ELISA法分别检测黏附分子VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达;用Western-blot法检测IκBα含量、磷酸化程度以及NF-κB p65亚基在细胞质和细胞核的分布情况;用GST-IκBα为底物检测IKK激酶活力。
结果高糖刺激可显著增加内皮细胞与单核细胞的黏附(P<0.01);显著增加内皮细胞黏附分子VCAM-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01);显著增加IKK激酶活力(P<0.01)、IκBα的磷酸化(P<0.01)以及NF-κB p65亚基在细胞核中的分布(P<0.05),显著降低IκBα含量(P<0.01)。利拉鲁肽可浓度依赖地抑制高糖刺激所产生的上述作用(P<0.05,P<0.01)。
结论利拉鲁肽可能通过抑制IKK激酶的活性,阻断IκBα的磷酸化及NF-κB的质核移位,进而抑制内皮细胞黏附分子mRNA和蛋白的表达,从而影响内皮细胞和单核细胞的黏附。