【摘 要】
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目的探讨外源性p53mut、p53wt和p16基因转染人肺癌细胞株H1299后对其Smad4蛋白表达的影响。方法运用PCR方法扩增p53mut、p53wt及p16基因,构建真核表达载体p IRES2-EGFP-p53mu
【机 构】
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南京江北人民医院胸外科; 南京医科大学附肿瘤医院胸外科;
【基金项目】
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江苏省“六大人才高峰”资助项目(2014-SWYY-002);南京江北人民医院院级科研基金(JKK201502)
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目的探讨外源性p53mut、p53wt和p16基因转染人肺癌细胞株H1299后对其Smad4蛋白表达的影响。方法运用PCR方法扩增p53mut、p53wt及p16基因,构建真核表达载体p IRES2-EGFP-p53mut、p IRES2-EGFP-p53wt及p IRES2-EGFP-p16,脂质体法单独或共转染H1299细胞。荧光显微镜下观察细胞中表达的带绿色荧光的增强型荧光蛋白(EGFP),使用RT-PCR验证质粒载体转染效果,使用Western blot检测转染后各组细胞Smad4蛋白表达水平的变化。结果转染72小时后在荧光显微镜下观察到被转染的H1299细胞发绿色荧光。经RT-PCR证实转染后的H1299细胞成功表达目的基因。Western blot法显示空载体组与空白对照组在Smad4蛋白表达上无明显差异(P>0.05),p53mut组Smad4蛋白表达较空载体组下调(P<0.05),而p53wt转染组或p53wt、p16联合转染组Smad4表达增强,且以后者的上调作用更为明显(P<0.05)。结论 p53mut转染可抑制H1299细胞的Samd4蛋白表达,而单独转染p16或共转染p16、p53wt可使Smad4蛋白表达上调,且以后者的上调作用更为显著。p53mut的促癌作用及p53wt和p16的抑癌作用可能与TGF-β/Smad4相关信号通路有关。
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