【摘 要】
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目的 建立一种快速、灵敏、特异的肠道病毒VP1基因分型巢式RT-PCR检测方法.方法 根据GenBank发表的肠道病毒全基因组序列,收集国内外文献,将文献中用于测序分型的引物进行总
【机 构】
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浙江萧山医院,浙江杭州310000
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目的 建立一种快速、灵敏、特异的肠道病毒VP1基因分型巢式RT-PCR检测方法.方法 根据GenBank发表的肠道病毒全基因组序列,收集国内外文献,将文献中用于测序分型的引物进行总结分析,在其VP1区设计并合成巢式RT-PCR引物,优化PCR反应条件,建立检测肠道病毒基因分型的巢式RT-PCR方法.将200株肠道病毒通用阳性,EV71、CA16阴性的临床标本及阴性对照、EB病毒、登革热病毒、流感病毒、腺病毒用该方法进行巢式RT-PCR扩增,随机选择30例PCR产物进行测序,明确本区肠道病毒流行基因型.结果 200份临床病例样本巢式RT-PCR扩增,124例有准确PCR扩增条带,阳性率为62％;阴性对照、EB病毒、登革热病毒、流感病毒、腺病毒均未扩增出条带;23例测序成功,7例比对失败,其中检出16份CA6阳性,阳性率为69.5％,6份CA12阳性,阳性率为26.1％,1份CA10阳性,阳性率为4.3％.结论 肠道病毒VP1基因分型巢式RT-PCR检测方法具有良好的灵敏度和特异度;本院就诊患儿肠道病毒基因型主要以CA6和CA12型为主.
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