【摘 要】
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目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的细胞焦亡在大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用及其机制.方法:常氧培养AECⅡ,并建立H/R损伤模型,随机分为:正常组(Con组,不做处理)、H/R组、NLRP3炎症小体激动剂(脂多糖和ATP,LPS+ATP)组(在H/R组的基础上用NLRP3炎症小体激动剂)及NLRP3炎症小体抑制剂(MCC950)组(在H/R组的基础上用NLRP3炎症小体抑制剂).实验结束后,收集细胞,采用CCK-8法检测各组细胞活力;
【机 构】
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温州医科大学缺血-再灌注损伤研究所,浙江温州325035;温州市人民医院呼吸内科,浙江温州325035
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目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的细胞焦亡在大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用及其机制.方法:常氧培养AECⅡ,并建立H/R损伤模型,随机分为:正常组(Con组,不做处理)、H/R组、NLRP3炎症小体激动剂(脂多糖和ATP,LPS+ATP)组(在H/R组的基础上用NLRP3炎症小体激动剂)及NLRP3炎症小体抑制剂(MCC950)组(在H/R组的基础上用NLRP3炎症小体抑制剂).实验结束后,收集细胞,采用CCK-8法检测各组细胞活力;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和caspase-1活性;免疫荧光染色法观察各组细胞NF-κB和caspase-1表达变化;Western blot检测细胞焦亡相关蛋白NF-κB、NLRP3、gas?dermin D(GSDMD)和白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平.结果:与Con组相比,其余3组细胞活力显著下降(P<0.05),LDH释放显著增加(P<0.05),caspase-1活性显著升高(P<0.05),NF-κB和caspase-1荧光表达显著增加(P<0.05),细胞焦亡相关蛋白NF-κB、NLRP3、GSDMD-N和IL-1β表达显著增加(P<0.05);与H/R组相比,MCC950组细胞活力显著升高(P<0.05),LDH释放显著减少(P<0.05),caspase-1活性显著下降(P<0.05),NF-κB和caspase-1荧光表达显著减少(P<0.05),NF-κB、NLRP3、GSDMD-N和IL-1β蛋白表达显著减少(P<0.05),而LPS+ATP组与H/R组相比,结果则与MCC950组呈相反趋势(P<0.05).结论:H/R可激活NF-κB信号通路,上调细胞焦亡相关蛋白表达,导致大鼠AECⅡ损伤;NLRP3炎症小体抑制剂MCC950可减轻H/R引起的大鼠AECⅡ损伤,其机制可能与其抑制NF-κB,减轻细胞焦亡有关.
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