【摘 要】
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目的:探讨蛭龙活血通瘀胶囊对U937巨噬细胞焦亡及NLRP3炎症小体活化的影响,验证其抑制细胞焦亡的机制.方法:利用佛波酯(PMA)将U937单核细胞诱导为巨噬细胞,LPS+ATP激活NLRP3
【机 构】
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西南医科大学附属中医医院心血管内科,泸州646000;澳门科技大学中医药学院,中国澳门999078
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目的:探讨蛭龙活血通瘀胶囊对U937巨噬细胞焦亡及NLRP3炎症小体活化的影响,验证其抑制细胞焦亡的机制.方法:利用佛波酯(PMA)将U937单核细胞诱导为巨噬细胞,LPS+ATP激活NLRP3炎症小体建立细胞焦亡模型;瑞氏染色观察细胞分化情况;CCK-8法筛选超滤后蛭龙活血通瘀胶囊成分对U937巨噬细胞活力值影响最适宜的用药浓度;将实验分为正常对照组、模型对照组及蛭龙活血通瘀胶囊3 μg/mL、10 μg/mL、30 μg/mL组,处理细胞后免疫印迹法测定各组细胞裂解物和培养上清液中核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Gsdmd-N、活化天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)蛋白的表达水平;高质粒转染NLRP3蛋白在细胞中的表达,流式细胞术及免疫印迹法检测蛭龙活血通瘀胶囊成分对转染后U937巨噬细胞抑制NLRP3蛋白表达的水平.结果:免疫印迹实验提示,与正常对照组相比,模型对照组NLRP3、Gsdmd-N、Caspase-1、1L-1.β蛋白表达水平显著上调(P＜0.01);经过蛭龙活血通瘀胶囊3 μg/mL、10 μg/mL、30 μg/mL干预后,NLRP3、Gsdmd-N和Caspase-1蛋白表达水平下调P＜0.05或P＜0.01);IL-1β表达水平显著下调(P＜0.01).经高质粒转染NLRP3后,与模型对照组相比,NLRP3高质粒转染组可以增强细胞焦亡,上调NLRP3蛋白表达水平(P＜0.01);与NLRP3高质粒转染+蛭龙活血通瘀胶囊30 μg/mL组相比,空质粒转染+蛭龙活血通瘀胶囊组可以减少细胞焦亡,降低NLRP3蛋白表达水平(P＜0.01).蛭龙活血通瘀胶囊成分无法逆转高质粒转染NLRP3蛋白表达.结论:蛭龙活血通瘀胶囊能够通过NLRP3信号途径抑制U937巨噬细胞焦亡.
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