【摘 要】
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提取盐单胞菌(Halomonas)C6的总DNA,用Sau3AⅠ部分酶切,回收15～30 kb的DNA片段,以pLAFR3为载体在大肠杆菌(E.coli)中构建了该菌的基因文库.以C6的基因文库为供体,以费氏中华根
【机 构】
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中国农业大学生物学院微生物系,北京,100094
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提取盐单胞菌(Halomonas)C6的总DNA,用Sau3AⅠ部分酶切,回收15～30 kb的DNA片段,以pLAFR3为载体在大肠杆菌(E.coli)中构建了该菌的基因文库.以C6的基因文库为供体,以费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)盐敏感菌株RC3-3r为受体,在辅助质粒pRK2013的协助下进行三亲本杂交,在选择培养基上筛选到接合子RWH15和RWH17.质粒检测表明,这两个接合子分别含有重组质粒pWH15和pWH17.通过三亲本杂交和功能互补的方法,对质粒pWH15进行两次亚克隆,最终得到3.2 kb的DNA片段.经检测,该片段能使RC3-3r恢复耐盐性.通过DNA测序及开放阅读框架(ORFs)分析,发现该片段上有4个开放阅读框架,其功能有待于进一步研究.
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