目的:了解甘肃省医疗机构结核病实验室现状，为解决现存问题提供参考。方法:2021年7月21日至2021年8月10日，甘肃省150家设有结核病实验室的医疗机构实验室负责人通过扫描甘肃省卫生健康委员会发布的文件附件中的二维码填写课题组自行设计的网络问卷，主要内容包括医院的基本信息、结核病实验室检测项目开展情况、实验室感染控制管理情况、手卫生与防护设备的配置和标识的配置等。共回收问卷150份，其中有效问卷146份，问卷有效率为97.33%。结果:146家医疗机构中，二级医院、三级医院和未定级医院分别有96家（65.75%）、38家（26.03%）和12家（8.22%）;综合医院和专科医院分别为97家（66.44%）和49家（33.56%）。开展抗酸杆菌涂片镜检、分枝杆菌培养和药物敏感性试验（简称“药敏试验”）的医疗机构分别有146家（100.00%）、116家（79.45%）和99家（67.81%）,其中，专科医院开展分枝杆菌培养和药敏试验的比例[分别为91.84%（45/49）和87.76%（43/49）]均明显高于综合医院[分别为73.20%（71/97）和57.73%(56/97],差异均有统计学意义（χ~2=6.929,P=0.008;χ~2=13.443,P＜0.001）。实验室感染控制管理方面的薄弱环节是仅有80家（54.79%）实验室有预防工作人员感染风险的疫苗接种计划，有5家（3.42%）实验室废物不能够进行分类管理，有20家（13.70%）实验室未能配置生物安全柜（二级医疗机构为17家）;96家二级医院中，未清晰标示出清洁区、缓冲区、污染区和未进行生物实验室风险评估的各有13家（13.54%）,并有11家（11.46%）未对实验室保洁人员进行定期培训；97家综合医疗机构中有7家未制定结核病实验室准入制度流程（7.22%）。而设施配置和重要标识配置方面的薄弱环节分别为未定级医院护目镜和洗手图的配置率[均为83.33%（10/12）]、操作致病性生物因子和生物防护级别的标识配置率[分别为74.66%（109/146）和85.62%（125/146）]均较低，且三级医院中有5家（13.16%）未标注有紧急联络方式。结论:甘肃省开展分枝杆菌培养和药敏试验的专科医院多于综合医院。需加强实验室感染控制相关管理措施和低级别医疗机构的硬件配置，以保证结核病实验室安全运行。