miR-193b表达上调对HBV阳性肝癌细胞的影响

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目的

探讨微小RNA-193b(miR-193b)表达上调对乙型肝炎病毒(HBV)阳性肝癌细胞凋亡、侵袭和转移的影响。

方法

HepG2.2.15细胞株培养至对数生长期后,以25、50、100 pmol的miR-193b mimic进行转染,对照组以空白mimic进行转染(0 pmol)。48 h后采用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-193b的表达,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检测Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达。

结果

qRT-PCR结果显示,miR-193b mimic(25、50、100 pmol)转染组和对照组HepG2.2.15细胞株中miR-193b表达量分别为1.05±0.09、1.53±0.12、2.08±0.17和0.49±0.12,4组间差异有统计学意义(F=261.35,P<0.001),各转染组与对照组相比,miR-193b表达明显增加(P=0.036;P=0.029;P=0.022)。流式细胞仪检测结果显示,miR-193b mimic(25、50、100 pmol)转染组和对照组HepG2.2.15细胞凋亡率分别为(30.28±5.22)%、(53.41±6.18)%、(79.89±7.13)%和(1.02±0.13)%,4组间差异有统计学意义(F=357.19,P<0.001),各转染组与对照组相比,细胞凋亡率明显增强(P=0.025;P=0.010;P=0.007)。细胞划痕实验结果显示,miR-193b mimic(25、50、100 pmol)转染组和对照组细胞迁移距离分别为(27.53±1.54)mm、(19.24±2.12)mm、(13.42±1.53)mm和(34.95±1.92)mm,4组间差异有统计学意义(F=408.62,P<0.001),各转染组与对照组相比,细胞迁移距离明显减小(P=0.032;P=0.007;P=0.006)。Transwell实验结果显示,miR-193b mimic(25、50、100 pmol)转染组和对照组细胞吸光度值分别为1.02±0.12、0.59±0.13、0.42±0.10和1.68±0.16,4组间差异有统计学意义(F=511.68,P<0.001),各转染组与对照组相比,细胞侵袭能力明显减弱(P=0.028;P=0.005;P=0.002)。Western blotting检测结果显示,miR-193b mimic(25、50、100 pmol)转染组和对照组HepG2.2.15细胞Bax、Bcl-2、MMP-9和MMP-2蛋白表达差异均有统计学意义(F=264.38,P<0.001;F=437.19,P<0.001;F=377.46,P<0.001;F=208.79,P<0.001),进一步两两比较,各转染组与对照组Bax、Bcl-2、MMP-9和MMP-2蛋白表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

miR-193b可诱导HBV阳性肝癌细胞凋亡,抑制HBV阳性肝癌细胞侵袭和转移,其机制可能与调控Bax、Bcl-2、MMP-9、MMP-2等蛋白表达有关。

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