斑马鱼Foxp4基因多克隆抗体的制备及检测

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Foxp4为Fox基因家族的一员,目前研究发现其与肺、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。按照巢式PCR原理,经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Foxp4基因片段,将其克隆人表达载体pGEX4T一1,转化至大肠杆菌BL21中,再通过IPTG进行诱导表达GST—Foxp4融合蛋白。融合蛋白先经谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,再经切胶纯化回收,然后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别进行Western—blot实验检测抗体效价和特异性。所
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