【摘 要】
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目的 通过构建慢病毒介导的微小RNA(miRNA)-1-小干扰RAN (siRNA),观察下调miR-1表达对人肝癌血管内皮细胞(TEC)生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-1-siRNA-GV159转染TEC,实验分为3组:(1)下调组(miRNA-1-siRNA,MD组);(2)阴性对照组(NC组);(3)空白对照组(CON组)
【机 构】
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430060武汉大学人民医院肝胆外科,430060武汉大学人民医院肝胆外科,430060武汉大学人民医院肝胆外科
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目的 通过构建慢病毒介导的微小RNA(miRNA)-1-小干扰RAN (siRNA),观察下调miR-1表达对人肝癌血管内皮细胞(TEC)生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-1-siRNA-GV159转染TEC,实验分为3组:(1)下调组(miRNA-1-siRNA,MD组);(2)阴性对照组(NC组);(3)空白对照组(CON组).分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期,划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 MTT结果显示MD组细胞在转染miRNA-1-siRNA-GV159后的第1、2、3、4、5天5个时间点均表现出吸光度值降低,与NC组及CON组比较差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞仪检测凋亡结果显示CON、NC、MD组凋亡率分别为(2.03±0.30)％、(2.18±0.15)％、(6.32±0.33)％,MD组细胞凋亡率比其他两组明显明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);而细胞周期检测结果显示3组之间差异无统计学意义(P＞0.05);划痕实验结果显示划痕12h后CON、NC、MD3组细胞的迁移距离分别为(270.6 ±44.5)、(299.5 ±28.7)、(198.4 ±49.6)μm,MD组和其他两组比较迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 下调miRNA-1表达可抑制TEC的增殖能力,增加TEC的凋亡并降低其迁移能力。
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