探讨骨髓标本放置不同时间对流式细胞术检测正常浆细胞(nPC)和克隆性浆细胞(cPC)中不同抗原表达的影响。
方法选择北京朝阳医院2017年9月至2018年1月初治的12例多发性骨髓瘤(MM)患者的骨髓标本为MM组,微小残留病(MRD)水平10-3~10-2;选择同期12例非浆细胞疾病患者的骨髓标本作为对照组。应用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝,2~8 ℃保存,分别在0、24、48和72 h标记荧光抗体组合CD56、CD138、CD45、CD38、CD117、CD81以及cκ、cλ、CD45、CD38、CD19、CD27。采用Diva软件分析以上10种抗原在nPC和cPC中表达的平均荧光强度(MFI),分析对照组nPC和MM组cPC占有核细胞的比例和绝对计数。
结果与0 h相比,对照组骨髓标本放置24 h时,nPC中各抗原表达的MFI差异均无统计学意义(均P>0.05)。放置48 h时,nPC中抗原CD38、CD138、CD27、cκ和cλ表达的MFI减低,与0 h比较差异均有统计学意义(28 943±6 591比23 569±7 587,P=0.018;1 412±399比817±223,P=0.014;12 855±3 734比9 210±3 660,P=0.005;26 712±9 025比17 247±5 078,P=0.026;17 707±8 633比8 307±3 158,P=0.049);CD45表达的MFI升高,与0 h比较差异有统计学意义(7 694±2 525比9 184±1 332,P=0.037)。放置72 h时,cκ和cλ表达的MFI高于0 h,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。与0 h相比,MM组骨髓标本放置24 h时,cPC中各抗原表达的MFI差异均无统计学意义(均P>0.05);放置48 h时,cPC中抗原CD38、CD138、CD81、cκ和cλ表达的MFI减低,与0 h比较差异均有统计学意义(16 664±11 744比10 130±10 026,P=0.003;2 041±1 145比1 371±696,P=0.047;2 679±784比1 524±1 153,P=0.025;29 102±18 138比18 372±10 327,P=0.038;16 314±12 728比9 752±6 271,P=0.034);放置72 h时,cκ和cλ表达的MFI高于0 h,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。随着放置时间的延长,nPC和cPC的绝对计数逐渐减低,放置24 h与0 h相比,差异均有统计学意义(均P<0.05),放置不同时间nPC和cPC比例分别比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。
结论骨髓标本放置不同时间对nPC和cPC中不同抗原表达的MFI和二者的绝对计数有影响,应在48 h内完成检测。